团 体 标 准 T/WSJD 18.5 —2021 工作场所空气中化学因素测定 肼的高效液相色谱法 Determination of chemical agents in workplace air — Hydrazine by high -performance liquid chromatography 中国卫生监督协会 发布 ICS 13.100 CCS C 52 2021-09-14发布 2021-10-01实施 全国团体标准信息平台 T/WSJD 18 .5—2021 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020给出的规则起草。 本文件由中国卫生监督协会提出并归口。 本文件起草单位：中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所、国家卫生健康委职业安全卫生研 究中心、北京市化工职业病防治院 。 本文件主要起草人：崔师伟、闫慧芳、潘亚娟、潘兴富、丁春光、刘晓东、郑玉桥。 全国团体标准信息平台 T/WSJD 18.5 —2021 1 工作场所空气中化学因素测定 肼的高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了工作场所空气中肼的高效液相色谱测定方法。 本文件适用于工作场所空气中蒸气态和气溶胶态肼浓度的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GBZ 159 工作场所空气中有害物质监测的采样规范 3 原理 工作场所空气中 蒸气态和气溶胶态的肼用硫酸溶液浸渍 玻璃纤维滤膜采集，用磷酸二氢钠、乙二胺 四乙酸二钠缓冲溶液洗脱， 1%苯甲醛 -乙腈溶液衍生为苄连氮，经色谱柱分离，紫外检测器 300 nm波长 下检测，以保留时间定性，测定峰高或峰面积，用外标标准曲线法进行定量。 4 仪器设备与 耗材 4.1 浸渍玻璃滤膜，孔径 1 μm。 4.2 空气采样器，流量满足 1 L/min～2 L/min。 4.3 滤料收集器，三段式。 4.4 螺口玻璃瓶（盖内衬聚四氟乙烯膜）， 12 mL。 4.5 精密微量注射器， 10 µ L，50 µ L，1000 µ L。 4.6 容量瓶， 10 mL，100 mL。 4.7 电子分析天平，感量 0.1 mg。 4.8 超高效液相色谱仪，具二极管阵列 检测器或紫外检测器 。 5 试剂 5.1 去离子水（ ρ≥18.2 MΩ）。 5.2 硫酸肼（ H6N2SO 4），色谱纯。 5.3 苯甲醛（ C7H6O），色谱纯。 5.4 乙腈（ C2H3N），色谱纯。 5.5 乙二胺四乙酸二钠（ C10H14N2O8Na2），优级纯。 全国团体标准信息平台 T/WSJD 18.5 —2021 2 5.6 磷酸二氢钠（ NaH 2PO 4），优级纯。 5.7 磷酸（ H3PO 4），ρ20=1.87 g/mL ，优级纯。 5.8 硫酸（ H2SO 4）， ρ20=1.84 g/mL ，优级纯。 5.9 洗脱溶液：准确称取磷酸二氢钠 6.24 g、乙二胺四乙酸二钠 7.44 g，溶于 400 mL去离子水 中，用 磷酸调节溶液的 pH=3.5；该溶液的磷酸二氢钠和乙二胺四乙酸二钠浓度分别为 0.1 mol/L 、0.05 mol/L 。 5.10 衍生溶液：准确移取 2.0 mL苯甲醛与 200 mL乙腈混匀；该溶液置于棕色瓶内避光保存。 5.11 滤膜浸渍溶液：取 1.5 mL浓硫酸用去离子水稀释至 200 mL。 5.12 标准储备溶液：准确称取 2.5365 g硫酸肼，用去离子水溶解并定容至 100 mL；该溶液硫酸肼浓 度为 25.365 mg/L ，相当于肼浓度为 6.25 mg/mL （32.06/130.12=0.2464 ）。 5.13 标准应用溶液 ：取 2.00 mL标准储备溶液于 10 mL容量瓶中，用去离子水定容至刻度；该溶液相 当于肼浓度为 1.25 mg/mL 。 6 样品的采集、运输和保存 6.1 样品采集 现场采样按照 GBZ 159 执行。 用装有两张滤膜的三段式滤膜收集器， 以 2 L/min 流量， 采集 15 min 空气样品。用装有两张滤膜的三段式滤膜收集器，以 1 L/min流量，采集 2 h～8 h空气样品。 6.2 样品空白 在采样同时用 装有两张滤膜的三段式滤膜收集器 ，立即封闭两端，按照样品采集后的方法进行转移 滤膜，与样品一起运输、保存和测定。 每批次现场样品不少于 2个样品空白。 6.3 样品运输和保存 采样后， 将采样后的前、 后段滤膜分别置于解吸瓶中， 于清洁容器内常温条件下运输。 样品置于 4℃ 条件下可稳定保存 25 d。 7 分析步骤 7.1 仪器操作参考条件 a) 色谱柱： 50 mm× 2.1 mm 1.7 µ m C 18 ； b) 流动相：乙腈 :水=70:30（体积比） ； c) 流速： 0.2 mL/min ； d) 波长： 300 nm； e) 柱温： 35° C； f) 进样体积： 2 µ L。 7.2 标准系列溶液的配制与测定 取5只容量瓶， 用洗脱溶液将标准应用溶液稀释成肼浓度为 0 μg/mL～30 μg/mL 的标准系列溶液。 分别取出 0.50 mL标准系列溶液置于色谱进样瓶中，加入 0.50 mL衍生溶液和 0.50 mL洗脱溶液， 室温下衍生反应 30 min。 全国团体标准信息平台 T/WSJD 18.5 —2021 3 参照仪器操作条件，将液相色谱仪调节至最佳测定状态，测定标准系列溶液，以测得的峰面积或峰 高值分别与其对应的肼浓度（ μg/mL）计算线性回归方程。 7.3 样品处理与测定 将样品的前、后段滤膜分别转入螺口玻璃瓶中，加入 5.00 mL洗脱溶液，不时振 摇，解吸 30 min。 取出 0.50 mL样品洗脱溶液于色谱进样瓶中，加入 0.50 mL衍生溶液和 0.50 mL洗脱溶液，不时振摇， 衍生反应 30 min后测定。 用测定标准系列溶液的操作条件测定样品和样品空白的洗脱溶液，测得样品峰面积或峰高值后， 由 线性回归方程计算肼的浓度（ μg/mL）。若样品洗脱溶液中肼浓度超出测定范围，可用洗脱溶液稀释后 测定，计算时乘以稀释倍数。 8 计算 8.1 按式（ 1）将样品的采样体积换算成样品的标准采样体积（ V20） 101.3 273293 20P tV V += ……………………………………… （1） 式中： V20 ——样品的标准采样体积，单位为升（ L）； V ——样品的采样体积，单位为升（ L）； t ——样品采集时的空气温度，单位为温度（ ℃）； P ——样品采集时的空气大气压强度，单位为千帕（ kPa）。 8.2 按式（ 2）计算空气中肼的浓度 2022 2011 VDv VDv+= ………………………………………… （2） 式中： ρ ——空气中肼的浓度，单位为毫克每立方米（ mg/m3）； ρ1,ρ2 ——测得前段滤膜、后段滤膜样品洗脱溶液中 肼的浓度，单位为微克每毫升（ μg/mL）； v ——滤膜样品洗脱液的体积， 单位为毫升（ mL）； V20 ——样品标准采样体积， 单位为升（ L）； D1,D2——与样品前段、后段滤膜 中肼剂量相当的洗脱效率。 8.3 时间加权平均接触浓度（ ρTWA）按 GBZ 159 规定计算。 9 说明 9.1 方法检出限为 19.4 ng/mL ，方法定量下限为 0.064 μg/mL ；测定范围为 0.064 μg/mL ～30 μg/mL ； 采集 30 L空气样品时，最低检出浓度为 0.003 mg/m3，最低定量浓度为 0.010 mg/m3；平均洗脱效率为 89.3%～95.5%，相对标准偏差为 1.11%～3.88%。 9.2 现场可能共存的异烟酰肼、氨基脲、苯甲醛、偏二甲基肼在本方法的测定条件下分离效果较好。 分离色谱参考图见图 1。 全国团体标准信息平台 T/WSJD 18.5 —2021 4 说明： 1——异烟酰肼、氨基脲； 2——苯甲醛； 3——偏二甲基肼； 4——肼的衍生物。 图1 色谱分离参考图 _________________________________ 全国团体标准信息平台