团体标准 甘草（甘草）煮散饮片 Gancao（Gancao）zhusanyinpian （完成时间： 2021年9月） T/GDATCM 0012－2021 2021-12-24发布 2022-03-24实施 广 东 省 中药 协会 发布 ICS 11.120.99 CCS C273 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/GDATCM 0012－2021 I 目 次 前 言 ................................ ................................ ............... III 引 言 ................................ ................................ ................. IV 1 范围 ................................ ................................ ................. 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ .......1 3 术语和定义 ................................ ................................ ........... 1 4 规范性技术要素 ................................ ................................ .......1 附录A ................................ ................................ .................. 4 附录B ................................ ................................ .................. 5 参考文献 ................................ ................................ .............. 15 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/GDATCM 0012－2021 III 前 言 本文件按照 GB/T1.1 —2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 本文件由广东省中医院（广东省中医药科学院） 提出。 本文件由广东省中药协会 归口。 本文件起草单位：广东省中医院（广东省中医药科学院）、 中国中医科学院中药研究所、中国医学 科学院药用植物研究所、平安 津村有限公司。 本文件主要起草人： 宫璐、徐江、姚辉、刘玉德、白俊其、 廖保生、丘小惠、 林小兰、黄志海、徐 文、张丹纯 。 全国团体标准信息平台 T/GDATCM 0012－2021 IV 引 言 甘草为豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根和根茎。具有补脾益气，清热解毒，祛痰 止咳，缓急止疼，调和诸药之功效。用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急 疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性。主要分布于新疆、内蒙古、 宁夏、甘肃、陕西朔州 ，以野生为 主；人工种植甘草主产于新疆、内蒙古、甘肃的河西走廊、陇西的周边，宁夏部分地区。甘草多生长在 干旱、半干旱的沙土、沙漠边缘和黄土丘陵地带，在引黄灌区的田野和河滩地里也易于繁殖。它适应性 强，抗逆性强。 甘草煮散饮片 来源于豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.干燥根和根茎炮制 成饮片后的 加工 品。传统煮散一般为捣碎至粗颗粒，宋代《太平惠民和剂局方》中规定，煮散剂服法上多注 “为粗末”， 然而并未详细规定其颗粒度大小。在充分参考历代煮散基本要求和现代煮散研究文献的基 础上，起草了 甘草（甘草） 煮散饮片标准。 全国团体标准信息平台 T/GDATCM 0012－2021 1 甘草（甘草）煮散饮片 1 范围 本文件规定甘草（甘草）煮散饮片的检测标准。 本文件适用于甘草（甘草）煮散饮片的质量 控制。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 不注日期的引用文件，其最新版本 （包括所有的修改单） 适用于本文件。 （1）《中华人民共和国药品管理法》 （2）《中华人民共和国中医药法》 （3）《中华人民共和国药典》 （4）《国家药品标准工作手册 》 （5）《广东省中医药条例》 （6）《中药煮散饮片质量标准研 究指导原则和技术要求》（试行） 3 术语和定义 3.1 来源 豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.干燥根和根茎炮制 成饮片后的 加工品。 3.2 中药煮散饮片 中药煮散饮片是将传统 中药饮片按 规定制成一定大小，供调配或医院制剂 使用的颗粒状中药饮片 。 4 规范性技术要素 【制法】 取甘草（厚片） ，制成粒度为 0.8～10.0mm的煮散饮片， 即得。 【性状】 本品呈不规则颗粒状。多见黄白色颗粒，可见表皮红棕色或灰棕色，具纵皱纹，或黄白 色颗粒。切面显纤维性，质坚实，气微，味甜而特殊。 【鉴别】 （1）本品粉末淡棕黄色。纤维成束，直径 8～14μm，壁厚，微木化，周围薄壁细胞含 草酸钙方晶，形成晶纤维。草酸钙方晶多见。具缘纹孔导管较大，稀有网纹导管。木栓细胞红棕色，多 全国团体标准信息平台 T/GDATCM 0012－2021 2 角形，微木化。 （2）取本品粉末 1g，加乙醚 40ml，加热回流 1小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇 30ml，加热 回流 1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水 40ml使溶解，用正丁醇提取 3次，每次 20ml，合并正丁醇液， 用水洗涤 3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇 5ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照 药材 1g，同法制成对照药材溶液。再取甘草酸单铵盐对照 品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为 对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典 2020年版通则 0502）试验，吸取上述三种溶液各 1～2μl，分别 点于同一用 1%氢氧化钠溶液制备的硅胶 G薄层板上，以乙酸乙酯 -甲酸 -冰醋酸 -水（ 15∶1∶1∶2）为 展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以 10%硫酸乙醇溶液， 在 105℃加热至斑点显色清晰， 置紫外光灯 （ 365nm） 下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；在与对照品色谱相 应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。 （3）DNA条形码分子鉴定 模板 DNA提取 取本品适量，研成细粉，用植物基 因组提取试剂盒提取供试品模板 DNA溶液， 置-20℃保存备用。另取甘草对照药材 适量，同法制成对照药材模板 DNA溶液，置 -20℃保存备用。 PCR反应 ITS2条形码通用引物 ：ITS2F（5′-ATGCGATACTTGGTGTGAAT -3′）和ITS3R （5′-GACGCTTCTCCAGACTACAAT -3′）。PCR反应体系 ：在200μl离心管中进行 ，反应总体积为 25μl， 反应体系包括 2× Taq PCR Mix 12.5 μl，通用引物 （2.5μmol/l）各1μl，模板 DNA 2μl，无菌超纯水 8.5μl。 将离心管置 PCR仪， ITS2条形码 PCR反应参数： 94℃预变性 5分钟，循环反应 40次（ 94℃ 30秒， 56℃ 30秒， 72℃ 45秒） ，延伸（ 72℃）10分钟。另取无菌超纯水，同法上述 PCR反应操作，作为空 白对照。 电泳检测 照琼脂糖凝胶电泳法（中国药典 2020年版通则 0541），凝胶浓度为 1.5%，凝胶中加入 核酸凝胶染色剂 GelRed；供试品、对照药材与空白对照 PCR反应溶液的上样量分别为 5μl，DNA分子 量标记上样量为 2μl（0.5μg/μl） 。电泳结束后，取凝胶片 在凝胶成像仪上或紫外透射仪上检视。供 试品 凝胶电泳图谱中， 在与对照药材凝胶电泳图谱相应的位置上， 在约 500bp处应有一条 DNA条带，空白 对照无条带。 测序 在紫外光灯下迅速切取 500bp处目的条带所在位置的凝胶，采用琼脂糖凝胶 DNA回收试剂 盒进行纯化。以 PCR扩增引物作为测序引物，使用 DNA测序仪对目的条带进行测序。 中药材 DNA条形码序列 对原始测序结果 应用有序列拼接功能的专业软件进行序列拼接， 去除引 物区，并使序列方向与 PCR扩增正向引物方向一致 。 结果判定 将获得的序 列与甘草基原植物甘草 G. uralensis的ITS2条形码标准序列 比对， 应在变异 范围内。甘草的 ITS2序列比对后长度为 223bp，有两个变异位点 ，分别为 10位点 G-A变异， 16位点 T-C变异。甘草 G. uralensis 的IT