65.020.01 CCS B 60 ICS DB21 辽 宁 省 地 方 标 准 DB21/T 3554—2021 杨树花枝控温盆栽及人工杂交技术规程 Technical regulations for temperature-controlled potted and artificial hybridization of poplar floral cuttings 2021 - 12 - 30 发布 辽宁省市场监督管理局 2022 - 01 - 30 实施 发 布 DB21/T 3554—2021 目 次 前 言 .............................................................................. II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 雌花枝盆栽温度控制 ................................................................ 2 5 人工杂交 .......................................................................... 2 6 种子采收与保存 .................................................................... 4 7 杂交苗培育 ........................................................................ 5 附 录 A（资料性）雌花枝盆栽控制室建设要求 ............................................ 7 附 录 B（资料性）雌花枝盆栽控制室建设示意图 .......................................... 8 附 录 C（资料性）不同杂交组合授粉情况调查表 .......................................... 9 附 录 D（资料性）不同杂交组合种子性状调查表 ......................................... 10 附 录 E（资料性）不同杂交组合种子出苗情况调查表 ..................................... 11 I DB21/T 3554—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的规 则编写。 本文件由辽宁省林业和草原局提出并归口管理。 本文件起草单位：辽宁省杨树研究所。 本文件主要起草人：彭儒胜、刘巍、蔄胜军、梁德军、尹杰、邢军、冯连荣、赵鑫闻、林晓峰、李 晓宇、侯庚、杨成超、倪鹏跃、庞忠义、吴建军、李亚楠、彭彦辉、高晓颖、李立功、安云全、杨冰。 本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈， 我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。 归口管理部门通讯地址：辽宁省林业和草原局（沈阳市和平区太原北街 2号），联系电话： 024-23448927。 本文件起草单位通讯地址：辽宁省杨树研究所（辽宁省盖州市团山镇任屯村），联系电话： 0417-7555835。 II DB21/T 3554—2021 杨树花枝控温盆栽及人工杂交技术规程 1 范围 本文件规定了杨树（populus L.）雌花枝盆栽温度控制、人工杂交、种子采收与保存和杂交苗培育 等方面的技术要求。 本文件主要适用于果期长、难生根的杨树离体花枝盆栽人工杂交，其它类型杨树可参考执行。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 10016 林木种子贮藏 DB21/T 3109 杨树扦插育苗技术及苗木质量分级 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 杂交 hybridization 基因型不同的生物体间相互交配。在林木育种中，通常指种间、亚种间、品种间、变种间的交配。 3.2 人工杂交 artificial crossing 在人为控制下的杂交。 3.3 亲本 parent 参与交配过程的父本和母本的总称。 3.4 杂交组合 hybrid match 指杂交双亲的组合与配置。 3.5 1 DB21/T 3554—2021 控制授粉 controlled pollination 按预定计划将目的花粉授予母本的授粉技术。 4 雌花枝盆栽温度控制 控制室温度要求3 ℃±0.5 ℃；花盆加热温度要求22 ℃~28 ℃。具体建设要求可参照附录A、附录 B。 5 人工杂交 5.1 亲本选配 5.1.1 亲本选择 选择符合育种目标，具有所需重要性状（基因型）的生长健壮、无病虫害、花芽发育良好的优良单 株作为亲本。 5.1.2 亲本选配 根据育种目标，选择具有优良性状、亲和力较强的父母本树种（品种）搭配杂交组合。 5.2 花枝采集及储藏 5.2.1 采集时间 辽宁地区雌花枝在2月末至3月初采集。雄花枝在2月末至4月初采集，最佳时间在雌花枝生根处理结 束前3 d~5 d。 5.2.2 林分要求 选择生长健康的中龄林、近熟林作为花枝采集林分。 5.2.3 花枝规格 选择树冠中上部花芽较多的健康花枝。雌花枝粗度1.5 cm~2.5 cm，长度80 cm~110 cm；雄花枝粗 度≥1.5 cm，长度60 cm~150 cm。 5.2.4 花枝储藏 花枝采集后，如不立即使用，应放入地窖或冷库中，温度控制在3 ℃~5 ℃，花枝基部培湿沙。 5.3 雌花枝处理 5.3.1 雌花枝盆栽 3 月上旬，以沙壤土和腐殖土（按 2：1 比例混匀）作为盆栽基质，将花枝基部剪成新切口后直立 栽植于上部内口径≥20 cm 的塑料花盆中，每盆栽植一个花枝，栽植深度为 15 cm 以上。栽植后浇透水， 待多余水分从花盆底部排水孔完全渗出后，用厚塑料袋从花盆底部至外沿包住花盆，然后放置于恒温水 槽中。 5.3.2 低温处理 2 DB21/T 3554—2021 雌花枝放入恒温水槽后，控制室温度控制在3 ℃±0.5 ℃，抑制花芽萌动。 5.3.3 加温生根处理 恒温水槽水位以放入花盆后液面低于水槽上沿1 cm左右为宜。黑杨派树种花枝温度设定为 25 ℃±1 ℃，处理26 d左右；青杨派树种花枝温度设定为23 ℃±1 ℃，处理23 d左右。 5.3.4 生根后管理 雌花枝生根处理结束后，移入温室，花盆搬运过程中要避免花枝晃动损坏根系。白天室温控制在 22 ℃~30 ℃，夜间不低于10 ℃，空气相对湿度控制在60 %~80 %，根据花盆基质湿度情况适时补水。 5.4 雄花枝处理 5.4.1 水培 在雌花枝移入温室前3 d~5 d，将雄花枝基部剪成斜切口，插入水培容器中。 5.4.2 日常管理 雄花枝水培过程中，采用打氧泵每天打氧2次~3次，每次20 min左右，每隔4 d~5 d换水一次，及 时清洗掉花枝基部分泌的粘液，并修剪掉基部腐烂部分。温湿度管理参照5.3.4执行。 5.4.3 花粉采集 雄花开放前，将不同父本花枝采用分室隔离法或套袋隔离法进行隔离，避免花粉互相污染；待花药 开裂，有少量花粉散落时即可采集花粉，采集前按不同父本分别准备清洁干燥培养皿、毛笔和白纸备用； 采集时用毛笔轻刷花序，将花粉收集到白纸上，清除花粉中的杂物后，装入培养皿中，标记父本名称及 采集时间，采集时间为9时至16时；花粉采集后，将盛放花粉的培养皿放置于无水CaCl2干燥器中，在 20 ℃~25 ℃环境下干燥24 h后，盖上皿盖并用医用胶布密封，保存于4 ℃冰箱备用，存放时间不超过7 d。 5.5 控制授粉 5.5.1 隔离 按照所授花粉的父本类型对雌花枝进行分区隔离，避免授粉时花粉飘散到其它雌花枝花序上。 5.5.2 疏花 授粉前进行疏花处理，每个花枝保留10个以下花芽。 5.5.3 花粉活力测定 采用培养基培养法进行花粉活力测定。培养基配方为：0.7 %琼脂+20 %蔗糖+100 mg/L硼酸，pH值 5.8。取2滴培养基于凹玻片上，用毛笔蘸取少量花粉均匀散于培养基上，在25 ℃的培养箱中培养24 h 后进行花粉萌发率（萌发率=（萌发的花粉数/100）×100 %）计算，萌发率≥80 %用于授粉。 5.5.4 控制授粉 待雌花开放，柱头发亮并有汁液分泌时即可授粉，授粉时间选择在9时至11或14时至16时。用毛笔 蘸取少量花粉，用手指轻轻弹动毛笔，使花粉散落在待授柱头上，花序下面授粉时可用手轻轻将花序直 3 DB21/T 3554—2021 立或翻转后再授粉，授粉时要避免毛笔触及柱头，也可采用授粉器授粉，授粉量不宜过大。同一授粉工 具一次只能用于同种父本的授粉。 5.5.5 标记与记录 授粉后及时挂牌标记并做好记录，详见附录C。 5.6 授粉后管理 授粉后果穗生长过程中疏掉发育不良的果穗。其它管理事项参照5.3.4.2执行。 6 种子采收与保存 6.1 种子采收 待蒴果变黄欲开裂时，用带有透明窗的羊皮纸袋套住果穗，蒴果开始飞絮时采收种子。调查结实情 况和种子性状，详见附录D。 6.2 种子保存 种子采收后及时播种。如需贮藏，参照GB/T 10016规定执行。 7 杂交苗培育 7.1 播种 7.1.1 播种容器 采用72孔或128孔塑料穴盘，规格为54 cm×28 cm，高度≥3.6 cm。 7.1.2 基质准备 将筛细的沙壤土、河砂和腐殖土按2：1：2比例混匀，经高温灭菌后分装于穴盘，轻轻压实至离穴 盘孔口2 mm~3 mm，喷水润湿后用于播种。 7.1.3 播种方法 在温室内进行播种育苗，用镊子将种子夹起，轻轻按压在穴盘孔中心基质表面后，覆土2 mm左右， 或用镊子将种子按压至2 mm~3 mm深，填平播种穴，每孔播1粒种子。播种后再次喷水，并盖上空穴盘。 7.1.4 标记 播种后及时