ICS 67.060 B 25 DB36 江 西 省 地 方 标 准 DB 36/T 1025—2018 饲料中呕吐毒素的快速筛查 胶体金快速定 量法 Screening of vomitoxin in animal feeding stuffs——rapid quantitative method of colloidal gold technique 2018 - 03 - 19 发布 江西省质量技术监督局 2018 - 09 - 20 实施 发 布 DB36/T 1025—2018 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 原理 .............................................................................. 1 4 试剂和材料 ........................................................................ 1 5 仪器和设备 ........................................................................ 2 6 样品制备与留存 .................................................................... 2 7 检测步骤 .......................................................................... 2 8 结果表述 .......................................................................... 3 9 重复性 ............................................................................ 3 附录 A（资料性附录） 胶体金快速定量检测条性能评价要求 ................................ 4 I DB36/T 1025—2018 前 言 本标准按照 GB/T 1.1《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 本标准由江西省农业厅提出并归口。 本标准起草单位：江西省兽药饲料监察所、北京勤邦生物技术有限公司、拜发分析系统销售（北京） 有限公司、双胞胎（集团）股份有限公司、江西正邦科技股份有限公司。 本标准主要起草人：符金华、杨琳芬、李瑾瑾、赵正苗、龙光宗、崔廷婷、廖丰、刘四宁、贺丽丽、 彭正学、王玉兰、徐国茂、赵薇娜、徐田放。 II DB36/T 1025—2018 饲料中呕吐毒素的快速筛查 胶体金快速定量法 1 范围 本标准规定了饲料中呕吐毒素的胶体金快速定量检测方法的原理、试剂和材料、仪器设备、样品制 备与留存、检测步骤、结果表述和重复性。 本标准适用于饲料产品及饲料原料中呕吐毒素的快速定量检测。检测限为0.5mg/kg，检测范围为 0.5mg/kg～5.5mg/kg 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 GB/T 27404 实验室质量控制规范 食品理化检测 3 原理 样品提取液中呕吐毒素的与检测条中胶体金微粒发生呈色反应，颜色深浅与样品中呕吐毒素的含量 相关。用读数仪测定检测条的颜色深浅，根据颜色深浅和读数仪内置曲线自动计算出样品中呕吐毒素的 含量。 4 试剂和材料 4.1 试剂纯度 饲料中呕吐毒素的快速筛查 胶体金快速定量法所用试剂均为分析纯，用水符合GB/T 6682二级水的 规定。 4.2 呕吐毒素残留检测试纸条 符合附录A规定的技术要求，并按说明书要求保存。 4.3 样本提取液 0.1%的Triton X-100水溶液：量取1L实验用溶液，加入1g Triton X-100，混匀。商品试剂盒中提 供此溶液。 4.4 氢氧化钠（NaOH 1.00mol/L） 称取40g氢氧化钠，加水定容至1000mL，混匀。 1 DB36/T 1025—2018 4.5 盐酸（HCL 1.00mol/L）： 量取83.33mL，ρ=1.18g/mL的盐酸，加水定容至1000.00mL，混匀。 5 仪器和设备 5.1 天平 感量0.01g。 5.2 涡旋仪 转速不低于1500r/min。 5.3 离心机 转速不低于3000r/min。 5.4 微量移液器 20μL～200μL。 5.5 读数仪 可测定并显示胶体金定量检测条的测定结果。 6 样品制备与留存 6.1 样品制备 按GB/T 20195要求制备样品，取有代表性的样品至少500g，粉粹及粉碎至全部通过0.85mm筛，混匀。 6.2 样品留存 如需留样，样品应置于-10℃～-20℃下避光保存。 7 检测步骤 7.1 样品提取 7.1.1 称取(5.00±0.01)g 谷物样品至 50.00mL 聚苯乙烯离心管中，加入 10.00mL 70%甲醇，将瓶塞 盖紧，涡动 3min，室温 3000r/min 以上离心 5min，取 100μL 上清液加入 200μL 样本稀释液，混匀，待 测。 7.1.2 非谷物基质， 如果上清液 pH 值小于 6 或大于 8， 则需要用 1.00mol/L 氢氧化钠溶液或 1.00 mol/L 盐酸溶液调节 pH 至 7 左右，然后取 100μL 此溶液加入 200μL 样本稀释液，混匀，待测。 7.2 样品检测 7.2.1 将胶体金检测条取出放置至最适试验温度 23℃～25℃。将读数仪打开，按照提示输入样品，检 测人员，检测项目，方法等相关信息。将比色卡平放于桌面，用读数仪扫描比色卡上的二维码，等待检 测。 2 DB36/T 1025—2018 7.2.2 准确移取 100μL 待测溶液，加入检测条加样孔中，准确计时 5min。 7.2.3 孵育 5min 后，用读数仪扫描检测卡，按下读取键，几秒钟读数仪的屏幕上即可显示测试样中呕 吐毒素的含量信息。 7.2.4 如结果显示：invalid ,如果检测条上质控线（C 线）无色，测试线（T 线）上颜色肉眼可见很 深，则表明试样中呕吐毒素含量非常高，可将试样提高稀释倍数，重新进行检测。 8 结果表述 呕吐毒素含量以mg/kg表示，由读数仪直接显示和读取。 9 重复性 在相同测定条件下的两次独立测试结果的绝对差值大于算术平均值20%的情况不超过5%。 3 DB36/T 1025—2018 AA 附 录 A （资料性附录） 胶体金快速定量检测条性能评价要求 本附录参照GB/T 27404的要求，规定了胶体金定量检测试纸条的技术性能要求，用于对胶体金快速 定量检测类产品的技术性能进行验证，以确认其适用于本方法。 A.1.1 准确度 采用700.00µg/kg、1000.00µg/kg和2000.00µg/kg三个浓度水平的样品，每个浓度水平测定不低于 6 次，通过偏差来表达，3个浓度水平的6次重复的偏差均应控制在-20%～+20%之间。 A.1.2 精密度 采用1000.00µg/kg浓度水平的实际样品，测定不低于6次，通过批内变异系数来表达，变异系数应 ≤20%。 A.1.3 检测限 计算20份阴性样品测定均值加3倍标准差，其结果应小于或等于产品灵敏度标示值。 A.1.4 批间稳定性 采用700.00µg/kg左右浓度水平的阳性样品，用至少6个不同批次的试剂条进行实验，每个批次测 定不低于2次，批内测定取平均值，通过批间变异系数来表达，变异系数应≤25%。 A.2 质控 检测阴性质控和阳性质控以验证检测条性能，购买有标准证书的阴性参考样及阳性参考样进行质 控，可根据参考样的证书上的真实含量水平对检测体系进行质控。 _________________________________ 4