ICS 11.100 SN A 80 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5156—2019 化学品 H295R类固醇合成试验方法 Chemicals—H295R steroidogenesistest method 业标准信息服务平台 2019-10-25发布 2020-05-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T5156—2019 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准与联合国经济合作与发展组织（OECD)化学品测试方法No.456（2011)《H295R类固醇生成 分析方法》英文版有关技术内容一致。 本标准做了下列结构和编辑性修改： 删除了介绍部分； 增加了“范围”一章； 增加了“规范性引用文件”一章； 将附录1改“为术语、定义和缩略语”二章； 将注意事项改为附录A； 将细胞培养方法改为附录B； 删除参考文献部分。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国天津海关。 本标准主要起草人：赵琢、王华、柳明、杨磊、翟自芹 标准信息服务平台 SN/T5156—2019 化学品 H295R类固醇生成试验方法 1范围 本标准规定了H295R类固醇生成的试验方法术语、定义和缩略语、试验原理、细胞培养程序、质量 控制要求、试验步骤、数据报告和分析以及试验报告。 本标准适用于筛查和评估化学品对内分泌系统的影响。 2术语、定义和缩略语 下列术语、定义和缩略语适用于本文件。 2.1 融合率confluency 细胞在培养基中的覆盖和扩散。 2.2 变异系数coefficientof variationCV 算数平均值分布的标准误差率。 2.3 成和代谢的一个酶家族。 2.4 每分钟衰变数 disintegrations per minute DPM 检测放射性材料每分钟衰退的释放量(原子数目)。 2.5 17B-雌二醇 17β-oestradiolE2 哺乳动物系统中最重要的雌激素。 2.6 人肾上腺癌细胞H295R 具有纬向未分化人胚胎肾上腺细胞的特性，并表达所有类固醇生成途径上的酶。可以从ATCC中 获得。 2.7 冷冻培养基freezemedium 用于细胞冻存的培养基。它由常备培养基，BDNu-血清和二甲亚砜构成。 2.8 线性范围linearrange 激素测试系统标准曲线内的一段范围，范围内样品中测试物的浓度成比例。 2.9 定量限limitofquantificationLOQ 在规定的可信限内，区分无该物质（空白值）的最低量。通常由测试系统的制造商定义。 1 SN/T 5156—2019 2.10 最低有影响浓度lowestobservedeffectconcentrationLOEC 样品浓度组与溶剂对照相比较有统计学差异的最低浓度。 2.11 最大无影响浓度noobservedeffectconcentrationNOEC 未出现阳性响应的最高测试浓度。 2.12 代数passage 细胞从冻存开始培养后传代的次数。冻存状态的初始细胞代数标记为1代。细胞传代一次后标记 为2 代。 2.13 phosphate buffer solution PBS 磷酸盐缓冲溶液 2.14 质量控制qualitycontrolQC 确保数据有效的措施。 2.15 质量控制板 qualitycontrolplate 包含阳性和阴性对照的24孔板，每种对照包含丙 于新批次细胞的性能监控或当测试 化学品时为分析提供阳性对照。 2.16 运行run 重设溶剂和对照的一次独立实验 2.17 准备其他试剂的基础,由 Dubec co's-Modified Eagle's Medium(DMEM培养基)和 Ham's F-12 信息服务平 添加碳酸氢钠作为缓冲。 2.18 补充培养基supplementedmedium -种常备培养基添加BDNu-血清和ITS十优质混合物后的培养基 2.19 类固醇生成steroidogenesis 是一种利用胆固醇生成多种类固醇激素的细胞信号通路。类固醇生成通路中合成的几种中间体如 黄体酮和辜酮，不但它们自身是重要的激素，而且它们还作用于激素前体细胞继续延伸生成通路。 2.20 睾酮testosteroneT 哺乳动物两个重要的雄激素之一。 2.21 测试板 testplate H295R细胞暴露于受测化学品的孔板。测试板由溶剂和两种化学品（7种浓度，三个平行）的孔 组成。