SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2014—2014 代替SN/T2014—2007 番茄黑环病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of Tomato black ring virus 行业标准信息服务平台 2014-04-09发布 2014-11-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2014—2014 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准代替SN/T2014一2007《番茄黑环病毒检疫鉴定方法》。 本标准与SN/T2014一2007相比，主要技术变化如下： 增加了IC-RT-PCR检测方法； 增加了附录A番茄黑环病毒简介。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 疫局。 本标准主要起草人：张裕君、郭京泽、杨翠云、王金成、刘鹏、廖芳、刘跃庭、夏惠娟、罗加凤、于翠。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： SN/T 2014—2007。 行业标准信息服务平台 I SN/T 2014—2014 番茄黑环病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了番茄黑环病毒检疫鉴定的方法。 本标准适用于植物种子、苗木、组培苗、无性繁殖材料中番茄黑环病毒的检疫鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T1840植物病毒免疫电镜检测方法 3番茄黑环病毒基本信息 学名：Tomatoblackringvirus 缩写：TBRV 分类地位：伴生豇豆病毒科（Secoviridae），线虫传多面体病毒属（Nepovirus）。 传播途径：该病毒通过线虫（Longidorusattenuatus和L.elongatus）传播、机械传播、种子（繁缕和 大豆等）传播，也可通过无性繁殖材料的运输远距离传播 番茄黑环病毒的其他信息参见附录A。 4原理 番茄黑环病毒的生物学特性、血清学特性、分子生物学和粒体形态特性（参见附录A）是鉴定该病毒 的依据。采用DAS-ELISA（双抗体夹心酶联免疫吸附测定）、免疫电镜、RT-PCR（逆转录聚合酶链反 应）、IC-RT-PCR（免疫捕获逆转录聚合酶链反应）技术检测番茄黑环病毒。采用以上技术做出的检测 结果，进行综合判定样品是否带有番茄黑环病毒 5仪器设备、设施和用具 5.1仪器设备 酶标仪、电子天平（1/10000g）、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、微量榨汁机、水浴锅、高压火菌锅 纯水仪、微波炉、磁力搅拌器、研钵研棒、低速离心机、高速冷冻离心机、生物培养箱、低温冰箱和一80℃ 超低温冰箱。 5.2设施 隔离检疫温室（10℃~30℃）。 5.3用具 可调微量移液器（2μL、10μL、100μL、200μL、1000μL、5000μL）及配套吸头、酶联板、离心管、研 1 SN/T 2014—2014 钵、pH计或各范围的pH试纸条、量筒、封口膜、吸水纸、白瓷盘及镊子等。 6 主要试剂 双抗体夹心酶联免疫吸附测定方法检测试剂（见附录B）、鉴别寄主生物学检测试剂（见附录C）、免 番茄黑环病毒检疫鉴定方法 7.1 DAS-ELISA检测 具体操作步骤见附录B。 7.2鉴别寄主生物学检测 具体操作步骤见附录C。 7.3 RT-PCR及IC-RT-PCR检测 具体操作步骤见附录D。 7.4免疫电镜检测 按照SN/T1840的规定执行。 8 结果判断 同时符合下述两项检测结果为阳性的，均可判定待测样品携带番茄黑环病毒： 经DAS-ELISA方法检测为阳性； 经RT-PCR方法检测为阳性， 示准线 经IC-RT-PCR方法检测为阳性； 经鉴别寄主生物学检测为阳性； 9记录结果与样品保存 9.1记录结果 记录实验数据，包括样品种类、来源，检测时间、地点、方法和结果等。DAS-ELISA检测结果应有 吸光值的数据报告，生物学检测应有鉴别寄主的典型症状照片，免疫电镜检测应有病毒粒子的照片， RT-PCR检测和IC-RT-PCR检测应有电泳结果照片。 9.2样品保存 冰箱中保存或冻干后4℃保存，保存期至少1年。做好登记和标记工作。 2