SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2798—2011 进出口蜂王浆中苯酚残留量的测定方法 高效液相色谱法 Determination of phenol residues in royal jelly for import and export- High performance liquid chromatography method 行业标准信息服务平台 2011-02-25发布 2011-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2798—2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国浙江出入境检验检疫局 本标准主要起草人：黄超群、谢文、陈笑梅、刘海山、史颖珠。 行业标准信息服务平台 SN/T 2798—2011 进出口蜂王浆中苯酚残留量的测定方法 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了蜂王浆中苯酚残留量液相色谱测定方法。 本标准适用于蜂王浆中苯酚残留量的测定 2方法提要 样品用甲醇沉淀蛋白质后，上层清液经HLB固相萃取柱净化。用配有荧光检测器的高效液相色 谱仪测定，外标法定量。 3试剂和材料 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为超纯水。 3.1甲醇：液相色谱纯。 3.2乙腈：液相色谱纯。 3.3甲醇-水（15+85，体积比）。 3.4甲醇-水（1十1，体积比）。 3.5苯酚标准物质（Phenol,CAS编号108-95-2，CHO）：纯度大于等于99%。 3.6苯酚标准储备液：准确称取适量的苯酚标准物质（3.5），用甲醇（3.1)配制成浓度为0.10mg/mL 的标准储备液，一18℃保存。有效期为6个月。 3.7苯酚标准工作液：根据需要用甲醇十水（3.4）溶液稀释成适当浓度的标准工作溶液，0℃～4℃保 存。有效期为3个月。 3.8HLB固相萃取柱（或相当者）：500mg，6mL。使用前用5mL甲醇10mL水预洗并保持柱体 息服务平台 湿润。 4仪器和设备 4.1高效液相色谱仪，配有荧光检测器。 4.2固相萃取仪。 4.3高速离心机：9000g。 4.4振荡器。 5试样制备和保存 取500g代表性蜂王浆样品，在室温下解冻，等样品全部融化后搅匀，将试样均分成两份，分别装入 样品瓶中，密封，并标明标记。一份作为试验样，另一份在一18℃保存。在制样的操作过程中，应防止 样品污染或发生残留物含量的变化。 1 SN/T 2798—2011 6测定步骤 6.1提取 称取试样4g（精确至0.01g），置于50mL离心管中，加入10mL水，振荡2min，再加人甲醇至 20.0mL，混匀，离心（9000g）5min。移取上层清液10.0mL至50mL离心管中，加水至30mL，待净化 6.2净化 将上述提取液过预先淋洗好的HLB固相萃取柱，再用5mL15%甲醇-水（15十85，体积比）溶液淋 洗，在真空负压下，减压抽十，弃去全部淋出液。用4mL甲醇以1mL/min的流速洗脱，收集全部洗脱 液，摇匀后加人1.0mL水，混匀，氮吹至1mL~2mL，用甲醇定容至2.0mL，0.45um滤膜过滤，供液 相色谱测定。 6.3测定 6.3.1液相色谱条件 6. 3. 1. 1 色谱柱：C18柱，5um，250X4.6mm（内径）或相当者。 6.3.1.2流动相：乙睛十水（30十70，体积比）。 6. 3. 1. 3 流速：1.0mL/min。 6.3.1.4检测波长：激发波长270nm，发射波长295nm。 6.3.1.5进样量:100μL。 6.3.2色谱测定 根据试样溶液中苯酚含量情况，选定峰面积相近的苯酚标准工作溶液。标准工作溶液和试样溶液 定。在上述色谱条件下，苯酚的参考保留时间为8.32min。苯酚标准物质的色谱图参见图A.1。 准信息服务平台 6.4空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行。 7 结果计算和表述 蜂王浆中苯酚残留量按式(1)计算： A.c..V ....(1) X= A..m 式中： X一—试样中苯酚的残留含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； Ai 试样溶液中苯酚的峰面积； 标准工作液中苯酚的浓度，单位为微克每毫升（ug/mL）； V一样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； A。一标准工作液中苯酚的峰面积； 最终样液所代表的试样量，单位为克（g）。 2