SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2802—2011 进出口动物源性食品中苯佐卡因 残留量的测定 液相色谱法 Determination of benzocaine residues in foodstuffs of animal origin for importand export-Liquid chromatographicmethod 行业标准信息服务平台 2011-02-25发布 2011-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2802—2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国海南出入境检验检疫局 本标准主要起草人：开智、卓海华、徐莉、纪少凡、庞书南。 行业标准信息服务平台 SN/T2802—2011 进出口动物源性食品中本佐卡因 残留量的测定 液相色谱法 1范围 本标准规定了进出口动物源性食品中苯佐卡因的液相色谱测定方法。 本标准适用于猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝、罗非鱼、鲈鱼、三文鱼、鳗鱼、虾中苯佐卡因残留量的测定。 2夫 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 谱进行测定，外标法定量。 4试剂和材料 所有试剂除特殊注明外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1乙睛：HPLC级。 4.2甲醇:HPLC级。 4.3正已烷：HPLC级。 4.4无水硫酸钠：650℃灼烧4h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。 4.55%甲醇溶液：量取5mL甲醇，加水定容至100mL。 4.6苯佐卡因标准品（Benzocaine，CAS编号：94-09-7，分子式：C,HnNO,）：纯度≥99.0%。 4.7标准储备液（200μg/mL）：准确称取适量苯佐卡因标准品，用甲醇（4.2）配制成浓度为200uμg/mL 的标准储备液，该标准储备液可置于4℃冷藏避光保存8个月。 4.8标准中间液：取适量标准储备液（4.7），用甲醇稀释成浓度为1μg/mL的标准中间液，可置于4℃ 冷藏避光保存1个月。 4.9标准工作液：取适量标准中间液（4.8）,用甲醇水溶液（4十6）稀释成浓度分别为0.010μg/mL， 0.025μg/mL，0.050ug/mL，0.10μg/mL，0.30μg/mL的标准工作溶液，即配即用 4.10HLB固相萃取小柱：6mL，200mg；临用前依次以5mL甲醇、5mL水活化，保持柱体湿润。 4.11无水硫酸钠玻璃层析柱（内径2cm、长度21cm）：玻璃柱内填入5g无水硫酸钠（4.4）。 4. 12 微孔滤膜：0.22um，有机系。 5仪器和设备 5.1超高效液相色谱仪：配紫外检测器。 1 SN/T 2802—2011 5.2组织捣碎机。 5.3分析天平：感量分别为0.1mg和10mg。 5.4离心管：50mL，具盖。 5.5涡旋混合器。 5.6离心机：9000r/min。 5.7旋转真空蒸发仪。 5.8氮气吹干仪。 6试样制备和保存 从原始样品中取出有代表性的可食部分样品，用高速组织捣碎机充分捣碎均匀，装人洁净容器作为 试样，密封，并标明标记。在制样过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化，制备好的试样 于一18℃以下避光冷冻存放 7测定步骤 7.1提取 称取5g试样（精确至0.01g），置于50mL离心管（5.4）中，加人15mL乙睛（4.1），涡旋提取 2min，9000r/min离心10min，将上清液转至另一50mL离心管中，样品残渣再加15mL乙睛重复提 取一次，合并提取液，过无水硫酸钠玻璃层析柱（4.11），收集流出液，待净化。 7.2净化 流出液（7.1）中加入15mL正已烷（4.3），涡旋1min，以4000r/min离心5min，弃去上层正已烷， 将下层乙睛转至旋转蒸发仪中，40℃以下旋转蒸发浓缩至大约1mL，加入10mL水，稀释混匀，以小于 1mL/min的流速过HLB柱（4.10），待样液完全流出后，用5mL5%甲醇溶液（4.5）淋洗柱体，弃去全 准信息服务平台 定容到2.0mL，过0.22um滤膜，供液相色谱测定。 7.3测定 7.3.1色谱条件 7.3.1.1色谱柱：BEHCs，1.7μm,2.1mmX50mm或相当者 7.3.1.2流动相：甲醇-水溶液（4十6，体积比）。 7.3.1.3流速：0.40mL/min。 7.3. 1. 4 柱温：40℃。 7.3.1.5进样量：10μL。 7.3.1.6检测波长：289nm。 7.3.2色谱测定 用（7.3.1）液相色谱条件测定标准工作溶液和样液，以标准曲线法测定样液中的苯佐卡因含量。样 液中苯佐卡因的响应值应在仪器线性响应范围内。标准工作液与待测样液等体积进样。在上述色谱条 件下，苯佐卡因的色谱峰保留时间约为1.18min。标准品的色谱图参见附录A。 2