SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3753—2013 葡萄角斑叶焦病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Pseudopezicula tracheiphila (Miller-Thurgau) Korf et Zhuang 行业标准信息服务平台 2013-11-06 发布 2014-06-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3753—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国宁波出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：段维军、郭立新、陈先锋、杜洪忠、张慧丽、顾建锋。 行业标准信息服务平台 SN/T 3753—2013 葡萄角斑叶焦病菌检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了葡萄等寄主植物上的葡萄角斑叶焦病菌的形态学检疫鉴定方法。 本标准适用于葡萄角斑叶焦病菌的检疫鉴定。 2 葡萄角斑叶焦病菌基本信息 学名：Pseudopeziculatracheiphila（Muller-Thurgau)KorfetZhuang(1986) 曾用名：PseudopezizatracheiphilaMull.-Thurg（1903) 无性型：Phialophoratracheiphila（Sacc.&.D.Sacc.)Korf1986 分类地位：真菌界（Fungi）、子囊菌门（Ascomycota）、锤舌菌纲（Leotiomycetes）、柔膜菌目（Helotia les）、柔膜菌科（Helotiaceae）、无柄盘菌属（Pseudopezicula）。 传播途径：病菌可随风、雨、昆虫和田间操作传播，随感病叶片和果穗远距离传播。 该病菌的其他相关资料参见附录A。 3方法原理 以葡萄角斑叶焦病菌的培养性状和病原菌形态特征作为鉴定依据。 行业标 4 仪器设备和主要试剂 4.1仪器设备 生物显微镜、超净工作台、高压灭菌器、生物培养箱、滤纸、手持放大镜、培养皿、烧杯、镊子、剪刀、载 玻片、盖玻片、量筒、吸管、滤纸、酒精灯。 4.2试剂 除另有规定外，所有试剂均为分析纯。麦芽汁、琼脂、次氯酸钠、无菌水、氢氧化钾、三氯乙酸、碘化 钾、碘、蒸馏水。 5病菌的鉴定 5.1症状检查 挑取病株，进行观察。病害症状描述参见附录A。 5.2 染色观察 5.2.1染剂 梅瑞氏染剂（Melzer'sreagent）：称取三氯乙酸100g、碘化钾5g、碘5g加蒸馏水定容至100mL 1 SN/T3753—2013 后使用。 梅瑞氏染剂可直接滴加于玻片作为负载剂使用。 5.2.2染色方法 碎叶片放置在玻片上，盖上盖玻片，滴加梅瑞氏染剂后，在显微镜下镜检观察子囊和子囊孢子的有无。 5.3病菌的分离培养 5.3.1培养基 麦芽汁培养基（MEA）：称取麦芽汁25g、琼脂20g，加热煮至琼脂完全溶化后，加蒸馏水补足1000mL 121℃高压灭菌20min。 或选用市售麦芽汁培养基，高压灭菌后使用。 5.3.2分离培养 孢子的产生。培养10d～15d后，观察并记录菌落特征。在显微镜下观察有性繁殖器官，如子囊盘、子 囊、子囊孢子等形态特征。 6鉴定特征 6.1培养性状 葡萄角斑叶焦病菌的菌落正面白褐色，气生菌丝少，背面浅褐色，参见附录B。 6.2病原菌形态特征 子囊盘垫状，无柄，新鲜时直径可达0.6mm.裂出于叶部组织，大多生长在叶背面；子实层新鲜时白 色，干燥时浅褐色。子实层平均厚度为105μm~130μm。 子囊无囊盖，内有8个子囊孢子，子囊一端膨大成棍棒状，另一端渐细，用氢氧化钾进行前处理后再 用梅瑞氏染剂对子囊顶端进行染色实验，可在顶端产生蓝色有顶环（十），如果不用氢氧化钾进行前处 理则无法看到蓝色有顶环，子囊大小为（115μm～145μm）×（18μm~28um） 子囊孢子椭圆形或一端扁平形，单核，透明无色，有油滴，（19.8μm～25.7um）×（9.3um~ 14.0μm)。侧丝丝状，有隔膜，透明，分枝且弯曲，或者在尖端略微变形，宽2.2μm~2.7μm。 无性型Phialophoratracheiphila分生孢子椭圆形，透明，单细胞，其上有油滴，平均直径为 （2.0μm~3.7μm）×（1.4μm~1.9μm）。分生孢子梗在形态上与营养菌丝有所不同，为烧瓶状单瓶梗， 有时轻微弯曲。 葡萄角斑叶焦病菌与近似种病原形态图及其区别，参见附录C和附录D。 7结果判定 以分离物的培养特征和培养性状作为鉴定依据，进行综合判定。若以上特征与6.1、6.2鉴定特征 符合，判定为葡萄角斑叶焦病菌。 2