SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3755—2013 豌豆脚腐病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Phoma pinodella (L.K.Jones)Morgan-Jones&K.B.Burch 行业标准信息服务平台 2013-11-06发布 2014-06-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3755—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：张秋娥、杜洪忠、严进、吴品姗、段胜男。 行业标准信息服务平台 SN/T3755—2013 豌豆脚腐病菌检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了植物检疫中豌豆脚腐病菌Phomapinodella（L.K.Jones)Morgan-Jones&K.B.Burch]的 检疫鉴定方法。 本标准适用于对来自疫区的豌豆脚腐病菌所有寄主植物的根、茎、叶及种子中的豌豆脚腐病菌的检 疫鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样 3豌豆脚腐病菌基本信息 学名：Phomapinodella 异名：Ascochyta pinodella；Phoma trifolii;Phoma medicaginis var.pinodella；Peyronellaed pinodella;Ascochyta sojicola;Phoma sojicola;Ascochyta sojicola;Phoma trifolii 分类地位：真菌界（Fungi），子囊菌门（Ascomycota），子囊菌纲（Ascomycetes），间座壳目（Dia porthales），黑腐皮壳菌科（Valsaceae）。 传播途径：以菌丝、分生孢子或分生孢子器随种子或植株残体的调运进行远距离传播。 准信息服 豌豆脚腐病菌的其他信息参见附录A。 4方法原理 5培养基、试剂及主要仪器设备 5.1培养基及试剂 麦芽膏琼脂培养基MA（麦芽膏25g，琼脂17g～20g，水1000mL）、燕麦片琼脂培养基0A（燕麦 粉30g，琼脂17g~20g，水1000mL）、1%次氯酸钠、无菌水、75%乙醇。 5.2仪器与设备 立体显微镜、生物显微镜（具油镜和测微尺）、电子分析天平（感量0.001g）、普通天平（感量0.1g）、 超净工作台、生物培养箱、高压灭菌锅。 1 SN/T3755—2013 67 检疫与鉴定方法 6.1症状检查 豌豆脚腐病菌侵染其寄主植株的症状参见A.3。 6.2分离培养 选取有症状的叶、茎或根，取病健交界处用75%乙醇表面消毒30S，无菌水冲洗3次，放于MA培 养基上，在（20士2）℃下，12h黑暗/光照交替培养。 种子：挑取变色或皱缩的种子先进行速冻，然后用1%次氯酸钠表面消毒1min，无菌水冲洗3次， 用无菌吸水纸吸干种子表面的水分。将种子均匀摆放至MA培养基上，在（20士2）℃下，12h黑暗/光 照交替培养。 分离的菌株采用单孢分离的方法进行纯化。 6.3形态学观察 纯化后的菌株转到MA和OA培养基上培养，观察菌落形态、颜色，分生孢子器生成方式及形态、 6.4致病性测定 选取苗龄为3周的豌豆苗，采用喷雾法接种浓度为1×105个/mL的孢子悬浮液40mL（含1μuL吐 温80）。以无菌水加吐温80为对照。保湿24h，然后转移到20℃，相对湿度为80%，12h光照的培养 室内培养。每天观察症状并记录。 6.5鉴定特征 6.5.1菌落特征 在MA或OA培养基上，病菌菌丝灰褐色至黑色，在培养基中成扇形扩展如毡状，菌落外缘规则。 在OA培养基上，培养7d后菌落直径为50mm～65mm；MA培养基上，培养7d后的菌落直径为 50mm~55mm，有大量具典型扇状树枝形晶体（见B.1）。 6.5.2形态学特征 分生孢子器球形或不规则，有孔口，直径96um～320μm。分生孢子透明，卵形或椭圆形，多数无 隔膜，偶尔有一个隔膜，大小为[4μm～7（~7.5）μm|×（2um~3.5um）。有时随培养时间的延长孢子 变黄褐色。 厚垣孢子单个或成串产生在菌丝顶端或中间，黑褐色，球形至不规则形，多数光滑，（8um～ 20μm)X（8μm~15μm）(见B.2和B.3）。 6.5.3致病性测定 致病性测定结果符合豌豆脚腐病症状特征（见B.4)且重新分离获得的病原菌形态学特征与6.5.1 和6.5.2描述吻合。 74 结果判定 根据鉴定标准，若分离物的鉴定结果符合6.5，即可判定分离物为豌豆脚腐病菌Phomapinodella。