̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ICS65.020.20 CCSB16 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4723—2022 代替SN/T 4723—2016 根结线虫属(中国种类)检疫鉴定方法 Detection and identification of Meloidogyne spp.(Chinese species) 2022-07-07发布 2023-02-01实施 中华人民共和国海关总署发布̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 目 次 前言 Ⅴ ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 1 ……………………………………………………………………………………………………… 2 规范性引用文件 1 ………………………………………………………………………………………… 3 术语和定义 1 ……………………………………………………………………………………………… 4 符号和缩略语 2 …………………………………………………………………………………………… 5 根结线虫属线虫基本信息和鉴定原理 2 ………………………………………………………………… 6 器材和试剂 3 ……………………………………………………………………………………………… 6.1 仪器设备和器具 3 …………………………………………………………………………………… 6.2 主要试剂 3 …………………………………………………………………………………………… 7 现场检疫与取样 3 ………………………………………………………………………………………… 7.1 症状检查 3 …………………………………………………………………………………………… 7.2 取样 3 ………………………………………………………………………………………………… 8 实验室检验 4 ……………………………………………………………………………………………… 8.1 线虫分离 4 …………………………………………………………………………………………… 8.2 体视显微镜镜检 4 …………………………………………………………………………………… 8.3 标本制作 4 …………………………………………………………………………………………… 8.4 生物显微镜观察、拍照和测量 4 ……………………………………………………………………… 9 形态学鉴定 4 ……………………………………………………………………………………………… 9.1 根结线虫属形态鉴定 4 ……………………………………………………………………………… 9.2 根结线虫属的判定 5 ………………………………………………………………………………… 9.3 根结线虫中国种形态鉴定 5 ………………………………………………………………………… 10 分子生物学鉴定 5 ………………………………………………………………………………………… 10.1 多重PCR方法 5 …………………………………………………………………………………… 10.2 种特异PCR方法 5 ………………………………………………………………………………… 10.3 线粒体DNA限制性内切酶片段长度多态性方法(mtDNA-RFLP方法) 5 …………………… 10.4 DNA条形码方法 5 ………………………………………………………………………………… 11 鉴定流程及结果判定 5 …………………………………………………………………………………… 12 记录和标本样品保存 6 …………………………………………………………………………………… 附录A (资料性) 根结线虫属其他相关信息 7 …………………………………………………………… A.1 生物学特性 7 ………………………………………………………………………………………… A.2 生态学特性 7 ………………………………………………………………………………………… A.2.1 地理分布 7 ……………………………………………………………………………………… A.2.2 寄主范围 7 ……………………………………………………………………………………… A.2.3 为害症状 7 ……………………………………………………………………………………… 附录B (资料性) 根结线虫名录(包括中国种25种,非中国种80种,共计105种) 9 ………………… ⅠSN/T4723—2022̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 附录C (资料性) 根结线虫属与孢囊线虫属区别 13 ……………………………………………………… 附录D (资料性) 25种根结线虫中国种形态特征描述 15 ……………………………………………… D.1 奇异根结线虫M.aberrans Ye,Xu,Yuan,Wang,Lin,Zhuo & Liao,2017 15 ………………… D.2 猕猴桃根结线虫M.actinidiae Li & Yu,1991 15 ……………………………………………… D.3 花生根结线虫M.arenaria(Neal,1889) Chitwood,1949 15 …………………………………… D.4 柑橘根结线虫M.citri Zhang,Gao & Weng,1990 15 ………………………………………… D.5 龙眼根结线虫M.dimocarpus Liu & Zhang,2001 16 …………………………………………… D.6 东海根结线虫M.donghaiensis Zheng,Lin & Zheng,1990 16 ………………………………… D.7 象耳豆根结线虫M.enterolobii Yang & Eisenback,1983 17 …………………………………… D.8 繁峙根结线虫M.fanzhiensis Chen,Peng & Zheng,1990 17 ………………………………… D.9 福建根结线虫M.fujianensis Pan,1985 17 ……………………………………………………… D.10 拟禾本科根结线虫M.graminicola Golden & Birchfield,1965 18 …………………………… D.11 禾本科根结线虫M.graminis(Sledge & Golden,1964) Whitehead,1968 18 ………………… D.12 海南根结线虫M.hainanensis Liao & Feng,1995 18 ………………………………………… D.13 北方根结线虫M.hapla Chitwood,1949 19 …………………………………………………… D.14 西班牙根结线虫M.hispanica Hirschmann,1986 19 ………………………………………… D.15 南方根结线虫M.incognita(Kofoid & White,1919) Chitwood,1949 19 …………………… D.16 爪哇根结线虫M.javanica (Treub,1885) Chitwood,1949 20 ………………………………… D.17 简阳根结线虫M.jianyangensis Yang,Hu,Chen & Zhu,1990 21 …………………………… D.18 济南根结线虫M.jinanensis Zhang & Su,1986 21 …………………………………………… D.19 孔氏根结线虫M.kongi Yang,Wang & Feng,1988 21 ………………………………………… D.20 林氏根结线虫M.lini Yang,Hu & Xu,1988 22 ……………………………………………… D.21 闽南根结线虫M.mingnanica Zhang,1993 22 ………………………………………………… D.22 番禺根结线虫M.panyuensis Liao,Yang,Feng & Karssen,2005 23 ………………………… D.23 悬铃木根结线虫M.platani Hirschmann,1982 23 …………………………………………… D.24 中华根结线虫M.sinensis Zhang,1983 24 ……………………………………………………… D.25 葡萄根结线虫M.vitis Yang,Hu,Liu,Chen,Peng,Wang & Zhang,2021 24 ……………… 附录E (资料性) 25种根结线虫中国种线描图 25 ………………………………………………………… 附录F (资料性) 多重PCR检测方法 56 ………………………………………………………………… F.1 引物序列 56 ………………………………………………………………………………………… F.2 单条线虫DNA提取 56 ……………………………………………………………………………… F.3 PCR 扩增 56 ………………………………………………………………………………………… F.3.1 PCR反应体系 56 ………………………………………………………………