SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4288—2015 Optimum Intrasect中转基因成分 定性 PCR 检测方法 Protocol of qualitative polymerase chain reaction method for detecting genetically modified corn line Optimum Intrasect 行业标准信息服务平台 2015-09-02发布 2016-04-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4288—2015 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中华人民共 和国上海出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：黄新、凌杏园、潘良文、张丽丽、朱水芳、陈洪俊、段胜男。 行业标准信息服务平台 1 SN/T 4288—2015 OptimumIntrasect中转基因成分 定性PCR检测方法 1范围 本标准规定了转基因玉米OptimumIntrasect中转基因成分定性实时荧光PCR检测方法 本标准适用于单粒玉米复合性状品系OptimumIntrasect（MON810×TC1507XNK603）的检测， 但不适合玉米加工产品中该品系成分的检测。 本标准中检测方法还适用于玉米及其产品中转基因单转化事件Bt11、GA21、MON810、MON863、 MON89034、TC1507、NK603、T25、MON88017、59122、MIR604、MIR162、LY038、3272和MON87460 的检测。 2 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T19495.1—2004转基因产品检测通用要求和定义 GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求 GB/T19495.3转基因产品检测 核酸提取纯化方法 GB/T19495.7 转基因产品检测 抽样和制样方法 3术语、定义和缩略语 3.1术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1 转基因复合性状品系stackedgeneticallymodifiedplants 是由两个和两个以上单转化事件（transgenic event)通过杂交或单转化事件再转化形成的叠合了两 个和两个以上性状的转基因新品系。 3.1.2 OptimumIntrasect 是由杜邦先锋公司研发的转基因玉米复合品系，由单转化事件MON810.TC1507NK603通过常 规杂交育成，叠合了源于品系MON810的抗虫性状和源于品系TC1507和NK603的耐除草剂草丁麟 和草甘麟性状。已在美国、日本、加拿大、巴西和阿根廷等国家获得批准商业化。 3.2 2缩略语 下列缩略语适用于本文件。 Adh1（AlcoholDehydrogenase):乙醇脱氢酶基因 1 SN/T4288—2015 bp(basepair）：碱基对 Ct值（C：Cycle，t：threshold）：每个反应管内荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数 CTAB(cetyltrithylammoniumbromide)：十六烷基三甲基溴化铵 DNA(deoxyribonucleicacid)：脱氧核糖核酸 EDTA(ethylene diaminetetraacetic acid)乙二胺四乙酸 PCR(polymerasechainreaction)：简称PCR Taq（Thermusaquaticu）：水生栖热菌 TE:Tris-HCI、EDTA缓冲液 TM(meltingtemperature）：熔解温度 Tris[tris（hydroxymethyl）aminomethanel：三（羟甲基）氨基甲烷 UNG酶（uracil-N-glycosylase）：尿嘧啶-N-糖基化酶（UNG）酶 Zein：玉米醇溶蛋白基因 4方法提要 PCR反应过程中，荧光信号的累积与PCR产物形成呈正相关，根据荧光信号的强度和扩增曲线Ct 值判定样品中是否含有特定的转基因玉米转化事件。由于现阶段已知转基因玉米复合品系均由已知的 单转化事件玉米杂交而成。在复合性状品系中，这些单转化事件的边界序列未发生改变，因此，通过对 5主要仪器及试剂 5.1主要仪器 实时荧光PCR仪；冷冻研磨仪；消毒灭菌锅；制冰机；核酸蛋白分析仪；高速冷冻离心机，台式小型 离心机，Mini个人离心机；低温冰箱；旋涡震荡器；微量移液器，生物安全柜。 5.2 主要试剂 除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格。 玉米内源基因和各单转化事件检测用边界序列的引物和探针序列见附录A。主要试剂参见附录B。 准信息服务平台 6防止污染措施 防止污染措施按GB/T19495.2的规定实施。 7抽样与制样 7.1抽样 按照GB/T19495.7中的规定获得实验室样品。 7.2 制样 表面污染DNA，最后用无菌水冲洗后晾干。用剪刀将每粒种子对中剪开，一分为二，取半粒玉米种子， 2