ICS11.220 CCSB41 中华人民共和国国家标准 GB/T47206—2026 牛泰勒虫病诊断技术 Diagnostictechniquesforbovinetheileriosis 2026-02-27发布 2026-09-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布目 次 前言 Ⅲ ………………………………………………………………………………………………………… 引言 Ⅳ ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 1 ……………………………………………………………………………………………………… 2 规范性引用文件 1 ………………………………………………………………………………………… 3 术语和定义 1 ……………………………………………………………………………………………… 4 缩略语 1 …………………………………………………………………………………………………… 5 临床诊断 1 ………………………………………………………………………………………………… 6 样品采集、保存与运输 2 …………………………………………………………………………………… 7 显微镜检查 2 ……………………………………………………………………………………………… 8 PCR检测 3 ………………………………………………………………………………………………… 9 间接ELISA 5 ……………………………………………………………………………………………… 10 综合判定 6 ………………………………………………………………………………………………… 附录A(资料性) 牛泰勒虫传播媒介蜱 7 ………………………………………………………………… 附录B(规范性) 显微镜检查及PCR检测涉及的试剂配制 9 …………………………………………… 附录C(资料性) 泰勒虫典型虫体形态 10 ………………………………………………………………… 附录D(资料性) PCR引物位置、阳性扩增产物电泳图 12 ……………………………………………… 附录E(资料性) MPSP重组抗原制备 14 ………………………………………………………………… 附录F(资料性) 牛泰勒虫标准阴、阳性血清的制备 16 ………………………………………………… 附录G(规范性) 间接ELISA方法涉及的试剂配制 17 ………………………………………………… ⅠGB/T47206—2026 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。 本文件起草单位:中国农业科学院兰州兽医研究所、河北农业大学、甘肃省动物疫病预防控制中心、 青海省动物疫病预防控制中心、宁夏回族自治区动物疾病预防控制中心、青海大学、澳东生物(深圳) 有限公司、新疆生产建设兵团畜牧兽医工作总站、廊坊市农业农村局、陇西县动物疫病预防控制中心。 本文件主要起草人:罗建勋、刘军龙、梁斌、赵帅阳、关贵全、殷宏、李知新、李志、李文京、李岩、孙雨、 李静、李英、张利、张旭、张莉、张议夫、邹联斌、付新成、宋军鹏、邳明伟、杜宝衍、丁宁、施远国、翟建新、 李艳。 ⅢGB/T47206—2026 引 言 牛泰勒虫病(Bovinetheileriosis)是由泰勒科、泰勒属的泰勒虫(Theileria)寄生于动物淋巴细胞和 红细胞引起的一种血液原虫病。患病动物以高热、贫血、体表淋巴结肿胀、消瘦等为主要临床症状,急性 感染导致动物死亡。引发该病的病原包含多种泰勒虫,国外该病病原主要为小泰勒虫(Theileirapar- va)、环形泰勒虫(Theileriaannulata)和东方泰勒虫/瑟氏泰勒虫/水牛泰勒虫组(Theileiraoriental- is/Theileriasergenti/Theileriabuffeli)。其中,东方泰勒虫/瑟氏泰勒虫/水牛泰勒组的命名至今仍存 在争议,在国外将该组泰勒虫统称为东方泰勒虫,而在我国则习惯将其称为瑟氏泰勒虫,为方便应用,本 文件中将其统一称为瑟氏泰勒虫。我国牛泰勒虫病的病原包含环形泰勒虫、瑟氏泰勒虫和中华泰勒虫 三种,其中环形泰勒虫和瑟氏泰勒虫是引起牛泰勒虫病的主要病原。我国将其列为三类动物疫病。 ⅣGB/T47206—2026 牛泰勒虫病诊断技术 1 范围 本文件描述了牛泰勒虫病的临床诊断,样品采集、保存与运输,以及显微镜检查、聚合酶链式反应 (PCR)、间接酶联免疫吸附实验(间接ELISA)等诊断方法。 本文件适用于牛泰勒虫感染的检测、牛泰勒虫病诊断及流行病学调查。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 NY/T541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 COB:细胞色素b基因(Cytochromeb) DNA:脱氧核糖核酸(DeoxyribonucleicAcid) dNTPs:脱氧核糖核苷三磷酸(Deoxy-ribonucleosideTriphosphate) ELISA:酶联免疫吸附试验(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay) HRP:辣根过氧化物酶(HorseradishPeroxidase) ITS:内转录间隔区(InternalTranscribedSpacer) MPSP:主要梨形虫表面蛋白(MajorPiroplasmaSurfaceProtein) OD值:光密度值(OpticalDensity) PBS:磷酸盐缓冲液(PhosphateBufferedSaline) PBST:磷酸盐吐温缓冲液(PhosphateBufferedSalineTween) PCR:聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction) TAE:三羟甲基氨基甲烷-乙酸-乙二胺四乙酸电泳缓冲液(TrisAcetate-EDTABuffer) Taq:水生栖热菌(ThermusAquaticus) TMB:3,3',5,5'-四甲基联苯胺(3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine) 5 临床诊断 5.1 流行病学 5.1.1 多发于4月至9月,主要在璃眼蜱和血蜱(见附录A中图A.1、图A.2)的分布区域传播流行。 1GB/T47206—2026 5.1.2 患病动物体表可见蜱叮咬或有叮咬史。 5.1.3 1岁~3岁牛多发;本地牛症状较轻,引进牛和改良牛常出现明显的临床症状。 5.2 临床症状 5.2.1 稽留热,体温维持在40℃~41.8℃之间。 5.2.2 眼结膜充血肿胀,可视黏膜苍白或黄染。 5.2.3 浅表淋巴结肿胀,质地坚硬,触诊敏感。 5.2.4 贫血,尿色淡黄或深黄,但无血尿。 5.3 病理变化 5.3.1 血液凝固不良;皮下有胶样浸润,呈黄色;黏膜和浆膜黄染,可见出血点。 5.3.2 体表淋巴结不同程度肿大,切面呈灰黄色,髓质有出血点。 5.3.3 皱胃黏膜肿胀、充血,有针头至黄豆大的黄白色或暗红色结节,结节顶部糜烂或溃疡。 5.4 结果判定 符合5.1流行特点,出现5.2和5.3中的一条或多条情况,初步判为牛泰勒虫病疑似病例。疑似病 例需采集外周血液及淋巴结穿刺液等样品进行实验室诊断。 6 样品采集、保存与运输 6.1 样品采集 6.1.1 血液样品:按照NY/T541的规定采集牛血液至真空抗凝采血管中,每份样品不少于2mL。 6.1.2 淋巴结穿刺液样品:选取体表肿胀明显的淋巴结,局部消毒后用无菌注射器直接刺入淋巴结 内,抽取淋巴结内液体并转移至无菌1.5mL管中,每份样品不少于0.5mL。 6.1.3 血清样品:按照NY/T541的规定采集牛血液至不含抗凝剂的真空采血管中,每份样品不少于 3mL。待血液凝固后,2000r/min离心10min,收集血清并分装于1.5mL离心管中。 6.2 样品保存与运输 样品采集后,置于保温箱中,加入预冷的冰袋,24h内送至实验室。如果24h内不能送达实验 室,样品需在2℃~8℃保存,不应超过4d。 7 显微镜检查 7.1 仪器设备 7.1.1 光学显微镜(配有100×物镜)。 7.1.2 单道微量移液器(1μL~10μL、10μL~100μL、100μL~1000μL)及配套吸头。 7.1.3 注射器。 7.2 试剂材料 7.2.1 姬姆萨染色液(按照附录B中B.1配制)。 7.2.2 甲醇。 7.2.3 香柏油。 2GB/T47206—2026