ICS11.220 CCSB41 中华人民共和国国家标准 GB/T47208—2026 片形吸虫病诊断技术 Diagnostictechniquesforfasciolosis 2026-02-27发布 2026-09-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布目 次 前言 Ⅲ ………………………………………………………………………………………………………… 引言 Ⅳ ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 1 ……………………………………………………………………………………………………… 2 规范性引用文件 1 ………………………………………………………………………………………… 3 术语和定义 1 ……………………………………………………………………………………………… 4 缩略语 1 …………………………………………………………………………………………………… 5 临床诊断 2 ………………………………………………………………………………………………… 6 样品采集和处理 2 ………………………………………………………………………………………… 7 病原学检查 3 ……………………………………………………………………………………………… 8 PCR检测 5 ………………………………………………………………………………………………… 9 间接ELISA 7 ……………………………………………………………………………………………… 10 综合判定 8 ………………………………………………………………………………………………… 附录A(规范性) 病原检查相关试剂配制 9 ……………………………………………………………… 附录B(资料性) 虫卵与虫体的典型形态特征 10 ………………………………………………………… 附录C(规范性) PCR溶液配制 12 ………………………………………………………………………… 附录D(资料性) PCR引物位置、标准阳性质粒及电泳图 13 …………………………………………… 附录E(规范性) 间接ELISA方法涉及的试剂配制方法 15 …………………………………………… 附录F(资料性) 肝片形吸虫ESP抗原的制备 16 ……………………………………………………… 附录G(资料性) 间接ELISA试验加样示例 18 ………………………………………………………… ⅠGB/T47208—2026 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。 本文件起草单位:中国农业科学院兰州兽医研究所、吉林大学。 本文件主要起草人:才学鹏、李建华、张少华、王帅、郭爱疆、邹扬、景志忠、王晓岑、刘明远、郭小腊、 骆学农、刘晓雷、李新、张旭、宫鹏涛、张楠、张西臣、李辉。 ⅢGB/T47208—2026 引 言 片形吸虫病是由肝片形吸虫(Fasciolahepatica)或大片形吸虫(F.gigantica)寄生于牛羊等多种 动物和人的肝脏胆管而引起的一种严重危害牛羊养殖业和人体健康的人兽共患寄生虫病。该病在兽医 临床以危害牛羊为主,典型症状为消瘦、贫血、水肿等,被世界卫生组织列为被忽视的热带病。我国属高 发地区,对牛羊养殖业健康发展和公共卫生安全造成严重威胁,我国将其列为三类动物疫病。 本文件包括片形吸虫病的临床诊断、病原学检查、PCR检测和间接ELISA检测方法。本文件规定 的病原学(虫卵/虫体)检查是诊断片形吸虫病的常规方法,PCR检测病原具有更高的特异性和灵敏 性,间接ELISA检测循环抗体能够实现高通量快速筛查。以上方法应用于片形吸虫病诊断,为快速和 准确诊断牛、羊片形吸虫病提供技术支撑。 ⅣGB/T47208—2026 片形吸虫病诊断技术 1 范围 本文件描述了片形吸虫病临床诊断、病原学检查、聚合酶链式反应(PCR)和酶联免疫吸附试验 (ELISA)等诊断方法。 本文件适用于牛、羊片形吸虫病的诊断、监测、流行病学调查、检疫等,其中病原学检查检测技术也 适用于防治效果评估。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 NY/T541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 BSA:牛血清白蛋白(BovineSerumAlbumin) CS:酪蛋白(Casein) DMSO:二甲基亚砜(DimethylSulfoxide) DNA:脱氧核糖核酸(DeoxyribonucleicAcid) EB:溴化乙锭(EthidiumBromide) ELISA:酶联免疫吸附试验(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay) EPG:每克粪便虫卵数(EggsPerGram) ESP:代谢-分泌产物(Excretory-SecretoryProduct) HRP:辣根过氧化物酶(HorseradishPeroxidase) IgG:免疫球蛋白G(ImmunoglobulinG) ITS:内转录间隔区(InternalTranscribedSpacer) OD:光密度(OpticalDensity) OVA:卵清蛋白(Ovalbumins) PBS:磷酸盐缓冲液(PhosphateBufferedSaline) PBST:含0.5%吐温-20的磷酸盐缓冲液(PBScontaining0.5%Tween-20) PCR:聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction) 1GB/T47208—2026 TAE:三羟甲基氨基甲烷-乙酸-乙二胺四乙酸电泳缓冲液(Tris-Aceticacid-EDTABuffer) TMB:四甲基联苯胺(3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine) 5 临床诊断 5.1 流行病学 5.1.1 季节:夏秋两季感染较多,秋末及冬季发病较高,温暖多雨地区发病较早、感染率上升。 5.1.2 分布:肝片形吸虫分布广泛,常呈地方性流行,多在有中间宿主(如小土蜗螺、青海萝卜螺、斯氏 萝卜螺、耳萝卜螺等)的低洼和沼泽地带的放牧地区发生;大片形吸虫分布于热带或亚热带,我国多在南 方地区发生。 5.1.3 感染源:病畜和带虫畜是主要感染源。 5.1.4 感染途径:通过采食被囊蚴污染的牧草或饮用流行区河水等感染。 5.1.5 易感宿主:牛、羊最易感;鹿、骆驼等多种动物及人亦能被感染。 5.2 临床症状 5.2.1 急性型:多见于羊,表现为体温升高,食欲减退,肝部压痛敏感,离群落后,严重者几天内死亡。 5.2.2 慢性型:多见,主要症状为消瘦,食欲减退,颌下、前胸、下腹部等水肿,贫血,眼结膜与口腔黏膜 苍白,生长发育受阻,生产性能降低,部分孕畜流产。 5.3 病理变化 5.3.1 急性型:表现为急性肝炎和内出血。可见肝肿大,肝包膜有纤维素沉积、出血;腹腔有血色液 体,腹膜充血、潮红、有炎性渗出物。 5.3.2 慢性型:表现为慢性肝炎和慢性胆管炎。早期肝脏肿大,后期萎缩硬化,小叶间结缔组织增生。 多量虫体寄生时,可见胆管扩张、肥厚、变粗,如绳索样凸出于肝脏表面;胆管内壁有盐类沉积,内膜粗 糙,切割时有“沙沙”声,牛多见。 5.4 结果判定 符合5.1所述流行病学特点,出现5.2和5.3所述临床症状和病理变化,初步判定为疑似病例;疑似 病例需采集粪便、剖检肝胆组织等,进行实验室诊断确诊。 6 样品采集和处理 6.1 仪器设备 6.1.1 低温高速离心机。 6.1.2 解剖刀、解剖剪、外科剪、平头镊子、托盘、瓷盆、大平皿(150mm)。 6.1.3 2.0mL离心管、无菌采血管、无菌采血针。 6.1.4 乳胶手套、一次性自封袋、记号笔等。 6.2 试剂材料 6.2.1 生理盐水。 6.2.2 动物组织DNA保存液:商品化试剂。 2GB/T47208—2026