ICS11.220 CCSB41 中华人民共和国国家标准 GB/T47221—2026 利什曼原虫病诊断技术 Diagnostictechniquesforleishmaniasis 2026-02-27发布 2026-09-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布目 次 前言 Ⅲ ………………………………………………………………………………………………………… 引言 Ⅳ ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 1 ……………………………………………………………………………………………………… 2 规范性引用文件 1 ………………………………………………………………………………………… 3 术语和定义 1 ……………………………………………………………………………………………… 4 缩略语 1 …………………………………………………………………………………………………… 5 临床诊断 1 ………………………………………………………………………………………………… 6 样本采集、保存及运输 2 …………………………………………………………………………………… 7 显微镜检查 3 ……………………………………………………………………………………………… 8 间接ELISA检测 4 ………………………………………………………………………………………… 9 PCR检测 5 ………………………………………………………………………………………………… 10 荧光定量PCR检测 7 …………………………………………………………………………………… 11 免疫层析试纸条检测 8 …………………………………………………………………………………… 12 综合判定 9 ………………………………………………………………………………………………… 附录A(资料性) 犬利什曼原虫病典型临床表现 10 ……………………………………………………… 附录B(资料性) 犬骨髓穿刺方法 12 ……………………………………………………………………… 附录C(规范性) 试剂配制方法 13 ………………………………………………………………………… 附录D(资料性) 犬利什曼原虫病淋巴结涂片中的无鞭毛体 15 ………………………………………… 附录E(资料性) 利什曼原虫可溶性全虫抗原制备 16 …………………………………………………… 附录F(资料性) PCR扩增产物电泳图及序列信息 17 ………………………………………………… 附录G(资料性) 荧光定量PCR扩增结果 18 …………………………………………………………… 附录H(资料性) 婴儿利什曼原虫rK39重组抗原的制备 19 …………………………………………… 附录I(资料性) 犬利什曼原虫病rK39免疫层析试纸条的制备 20 …………………………………… 附录J(资料性) 犬利什曼原虫病rK39免疫层析试纸条 21 …………………………………………… ⅠGB/T47221—2026 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。 本文件起草单位:河南农业大学、首都医科大学附属北京友谊医院、四川大学、信阳市畜牧兽医技术 服务中心、郑州中道生物技术有限公司、中国质量检验检测科学研究院、中国动物疫病预防控制中心。 本文件主要起草人:张龙现、邹洋、李俊强、毋亚运、陈建平、郎家抒、卢基忠、赵林萍、赵金凤、 吴绍强、蔺东、李晓迎、王荣军、马超锋、许会艳。 ⅢGB/T47221—2026 引 言 利什曼原虫病是锥体科(Trypanosomatidae)利什曼属(Leishmania)的利什曼原虫(Leishmania spp.)感染所致的人兽共患寄生虫病。我国利什曼原虫病主要分为人源型、犬源型和野生动物源型。犬 源型主要分布在我国甘肃、四川、陕西、山西、河南、河北等地区,犬为主要的传染源。我国在1958年已 基本消除利什曼原虫病,然而近年来疫情又呈现逐渐回升的趋势,多地病例迅速增加,以陕西、山西、河 南、河北为犬源型利什曼原虫病的重疫区。我国将犬利什曼原虫病列为三类动物疫病。 利什曼原虫属包含53个利什曼原虫虫种,其中20种具有人类致病性。据世界卫生组织(WHO)统 计,全球每年约新增90万~160万病例;据中国疾病预防控制中心(CDC)统计,2023年全国有15个省 的125个县共报告人内脏利什曼病病例299例,其中犬源型(山丘型)内脏利什曼病(79.3%,237例/ 299例)由婴儿利什曼原虫(Leishmaniainfantum)引起。 犬是婴儿利什曼原虫的天然宿主,在“犬—蛉—人”传播链中起关键作用,白蛉属吸血昆虫是主要传 播媒介。犬感染虫种均是婴儿利什曼原虫(L.infantum),本文件以检测婴儿利什曼原虫感染为主要 目标。 ⅣGB/T47221—2026 利什曼原虫病诊断技术 1 范围 本文件描述了婴儿利什曼原虫(Leishmaniainfantum)感染引起的犬利什曼原虫病的临床诊断、样 本采集保存及运输、显微镜检查、间接ELISA、PCR、荧光定量PCR和免疫层析试纸条等方法。 本文件适用于犬利什曼原虫病的诊断、监测和流行病学调查。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 NY/T541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 DMSO:二甲基亚砜(DimethylSulfoxide) DNA:脱氧核糖核酸(DeoxyribonucleicAcid) EDTA:乙二胺四乙酸(EthyleneDiamineTetraaceticAcid) ELISA:酶联免疫吸附试验(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay) HRP:辣根过氧化物酶(HorseradishPeroxidase) ITS:内转录间隔区(InternalTranscribedSpacer) PBS:磷酸盐缓冲液(PhosphateBufferedSaline) PCR:聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction) rK39:重组K39蛋白(TherecombinantproductofK39) TAE:Tris-乙酸电泳缓冲液(TrisAcetate-EDTABuffer) TMB:3,3',5,5'-四甲基联苯胺(3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine) 5 临床诊断 5.1 流行特点 5.1.1 呈现季节性、地域性分布,与传播媒介白蛉活动季节和区域密切相关。 5.1.2 发病年龄呈“双峰型”分布,80%的被感染犬在3岁以下,另一个感染高峰在8岁~10岁。 1GB/T47221—2026 5.1.3 无症状感染犬也具有传染性,也能成为传染源。 5.1.4 所有品种犬均对利什曼原虫易感。 5.1.5 潜伏期长,犬感染后4个月~5个月才会出现症状,幼犬更易感。 5.2 临床症状 5.2.1 皮肤型利什曼原虫病病变典型,表现为眼周围和身体其他部位的脱毛,以及皮脂外溢、结节和溃 疡,以头部尤其是耳、鼻、唇部、面部两侧和眼睛周围最为显著,有“癞皮狗”之称(见附录A中的图A.1)。 5.2.2 内脏型利什曼原虫病的临床症状缺乏特异性,对不同机体系统的慢性损害差异显著(见图A.2)。 5.3 病理变化 5.3.1 广泛性皮炎,浆膜、黏膜苍白且有出血斑点,肝、脾、淋巴结肿大。 5.3.2 典型的肉芽肿性炎症,巨噬细胞中存在大量无鞭毛体,患病犬的巨噬细胞被破坏且发生增生。 5.4 结果判定 符合5.1的流行特点,并出现5.2典型临床症状和/或5.3的典型病理变化,可判为疑似犬利什曼原 虫病例。 6 样本采集、保存及运输 6.1 仪器设备 6.1.1 灭菌剪刀。 6.1.2 灭菌镊子。 6.1.3 电动剪毛剪。 6.2 试剂材料 6.2.1 局部麻醉药。 6.2.2 含有约2mL2.5%~3%EDTA的培养皿。 6.2.3 真空采血管(EDTA抗凝管)。 6.2.4 采血管。 6.2.5 尾静脉采血6号针头、颈静脉采血16号针头。 6.2.6 0.5mL、1mL、2mL、5mL、10mL、20mL容量的一次性注射器。 6.2.7 14G~18G带针芯的骨髓针。 6.2.8 载玻片。 6.2.9 显微血细胞比容毛细血管和毛细血管球。 6.2.10 10号、11号手术刀片。 6.3 抗凝血样本的采集处理 做好犬只的保定,确定采血部位,对采集血样的犬耳静脉或者前肢局部消毒后,静脉采集全血 3mL~5mL,使用抗凝真空采血管,充分摇匀后置于2℃~8℃条件下冷藏保存。 6.4 血清样本的采集处理 6.4.1 犬耳静脉或者前肢局部消毒。 6.4.2 静脉无菌采血3mL~5mL,转移至采血管。 2GB/T47221—2026