SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4648—2016 柑橘黑斑病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Guignardia citricarpa Kiely 行业标准信息服务平台 2016-08-23发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4648—2016 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局、浙江大学、中华人民共和国江西出人境 检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国安徽出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：王卫芳、李红叶、王兴红、吕文刚、何瑞芳、何日荣、黄河、吴品珊、陈雪娇。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4648—2016 柑橘黑斑病菌检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了柑橘黑斑病菌（GuignardiacitricarpaKiely）的检疫鉴定方法 本标准适用于柑橘（柑、橘、柠檬、橙、柚、金橘、积）水果和苗木生产、加工及进出口贸易中柑橘黑斑 病菌的检疫和鉴定。 2 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T1806出境柑橘鲜果检疫规程 3柑橘黑斑病菌的基本信息 学名：GuignardiacitricarpaKiely（1948）（中文名：柑橘球座菌） 无性型：Phyllostictacitricarpa（McAlpine）Aa(1973) 异名：PhomacitricarpaMcAlpine（1899） Phoma citricarpa McAlpine (1899)var. citricarpa Phoma citricarpa var. mikan Hara (1925) Phyllostictina citricarpa (McAlpine)Petr.(1953) 分类地位：在分类上隶属于真菌界（Fungi），子囊菌门（Ascomycota），座囊菌纲（Dothideomycetes）， 葡萄座腔菌目（Botryosphaeriales），叶点霉科（Phyllostictaceae），球座菌属（Guignardia）。 柑橘黑斑病菌的寄主范围、地理分布、为害症状参见附录A，病菌的培养性状和形态特征图参见附 录B和附录C,柑橘黑斑病菌与近似种比较参见附录D。 4 检疫鉴定原理 服务平台 以寄主上病果的症状特点、病菌的形态学特征或病菌的形态学特征及培养性状作为柑橘黑斑病菌 的检疫鉴定依据。 5仪器及用具 5.1 仪器设备 体视显微镜、生物显微镜、电子天平（感量0.1g）、电磁炉、高压灭菌器、超净工作台、培养箱、冰冻切 片机。 5.2实验用具 样品袋、保鲜袋、标签、定性滤纸、手持放大镜、酒精灯、载玻片、盖玻片；火焰消毒的接种针、镊子、解 1 SN/T4648—2016 玻棒、铝锅（直径24cm）。 6试剂和培养基 6.1试剂 1%次氯酸钠（NaOCI)溶液、70%乙醇、蒸馏水、无菌水。 6.2培养基 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)和燕麦琼脂培养基(OA)，培养基配方与配制方法见附录E。 7检疫鉴定方法 7.1产地检疫 在柑橘成熟期、采果期、加工期于出口基地及加工包装厂抽取未采摘、已采摘、已加工、已包装的橘 果，检查果皮是否有柑橘黑斑病症状，病斑上是否有黑色小颗粒状分子孢子器（症状描述和图片 参见A.4、附录B），抽取有可疑症状（包括有明显和无明显分子孢子器）的病果样品带回实验室作进 步检验，抽样与取样按照SN/T1806进行。 7.2实验室检验 7.2.1症状检查 在体视显微镜下观察记录病斑的细微特征，包括病斑的形态、大小和颜色、病斑上聚生的分生孢子 器，并拍摄数码照片。 7.2.2切片检查 如果病果果皮上的病斑有明显的黑色小颗粒状分生孢子器，则切取病斑，置于体视显微镜下细致观 察病斑的形态、颜色及大小，然后对病斑组织进行徒手切片或冰冻切片，将切片置于生物显微镜下观察 标准信息 病菌的形态学特征。 7.2.3病斑分离培养 7.2.3.1切取 离培养。 7.2.3.2组织表面消毒 用解部刀将病健交界组织切成4mm×4mm进行表面消毒（70%乙醇浸泡1min或1%NaOCl 溶液浸泡1min，无菌水冲洗3次），最后用无菌滤纸吸干表面水分，作为分离培养材料备用。 7.2.3.3分离培养 将表面消毒好的病组织块移至PDA平板上，在27℃/24h全黑暗下培养。培养第5d，用无菌接 种针从菌落边缘挑取菌丝块移至新的PDA平板上纯化培养10d，将纯菌株置于4℃下保存待用 2