SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3064.5—2011 国境口岸蝇类、畵镰携带重要病原体 检测方法 第5部分：普通变形杆菌和奇异变形杆菌 Detections of important pathogens in flies and cockroachs at frontier port- Part 5:Proteus vulgaris and Proteus mirabilis 业标准信息服务平台 2011-09-09发布 2012-04-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3064.5—2011 前言 SN/T3064《国境口岸蝇类、董携带重要病原体检测方法》分为11部分： 第1部分：通用要求； 第2部分：沙门氏菌； 第3部分：志贺氏菌； - 第4部分：致泻性大肠杆菌； 第5部分：普通变形杆菌和奇异变形杆菌； 一 第6部分：霍乱弧菌； 第7部分：副溶血性弧菌； 第8部分：金黄色葡萄球菌； 第9部分：蜡样芽孢杆菌； 第10部分：甲型肝炎病毒； 第11部分：寄生虫卵（包囊）。 本部分为SN/T3064的第5部分。 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局 本部分主要起草人：张海滨、刘培、关淳、高旗利、张霞、何晨光。 行业标准信息服务平台 I SN/T3064.5—2011 国境口岸蝇类、携带重要病原体 检测方法 第5部分：普通变形杆菌和奇异变形杆菌 1范围 SN/T3064的本部分规定了国境口岸输入性蝇类和董携带普通变形杆菌和奇异变形杆菌的检 测方法、结果判断、结果报告及阳性结果处置。 本部分适用于检验检疫机构对输入性蝇类和董携带普通变形杆菌和奇异变形杆菌的检测和 报告。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂 3样本检测 3.1培养基和试剂 需要的培养基和试剂为GN增菌液，伊红美蓝琼脂（EMB），营养琼脂（NA），SS琼脂，尿素琼脂，蛋 白陈水，克氏双糖培养基，苯丙氨酸培养基，鸟氨酸脱羧酶试验培养基，明胶培养基，糖发酵管。具体成 分及制备方法见GB/T4789.28。除另有规定外，所用试剂为分析纯或生化纯，水为蒸馏水。 3.2检测程序 变形杆菌和奇异变形杆菌检测程序参见附录A。 3.3操作步骤 3.3.1增菌与分离 分别取1mL样本处理液加人到100mLGN肉汤中，将GN肉汤放入温箱中，置于36℃土1℃，培 养18h～24h。摇匀GN增菌液，取一环GN增菌液，四区法划线分别接种于SS琼脂和EMB琼脂平 板，置36℃士1℃培养18h～24h。观察是否有可疑菌落生长，如有可疑菌落，从平板上至少挑取2个 可疑菌落进行鉴定。 普通变形杆菌和奇异变形杆菌在SS琼脂上的典型菌落特征为：1mm2mm大小，无色半透明或 有黑色中心，边缘整齐，表面光滑的圆形菌落。 在EMB上呈透明或半透明、光滑、波纹状蔓延生长菌落 3.3.2纯培养 从SS琼脂和EMB琼脂平板上各挑取可疑菌落，划线接种NA平板培养基，置36℃士1℃，培养过 夜，进行以下试验。 1 SN/T 3064.5—2011 3.3.3革兰氏染色 变形杆菌为革兰氏染色阴性杆菌，不形成芽抱。 3.3.4初步生化鉴定 分别接种纯培物于克氏双糖琼脂、尿素琼脂、苯丙氨酸琼脂各一管。于36℃土1℃，培养18h～24h， 分别观察结果。 普通变形杆菌和奇异变形杆菌应同时满足以下条件： a) 硫化氢阳性； b）尿素酶阳性； ）苯丙氨酸脱氨酶阳性。 3.3.5生化鉴定 同时满足以上要求的纯培物要按照表1做进一步生化鉴定，也可采用API20E或VITEK进行 鉴定。 表1普通变形杆菌和奇异变形杆菌生化性状 生化项目 普通变形杆菌 奇异变形杆菌 靛基质 + 鸟氨酸脱羧酶 + 麦芽糖发酵 + 木糖发酵 + + 鼠李糖发酵 业标准信 甘露醇发酵 明胶液化 十 + 4 结果判定 在分离培养基上无特征菌落；或有特征菌落，菌体形态或生化性状不符，则判定为普通变形杆菌和 奇异变形杆菌阴性。 若分离培养基上有特征菌落且菌体形态和生化性状相符，则判定为普通变形杆菌和（或）奇异变形 杆菌阳性。 5纟 结果报告 结果判定为阴性，报告该批样本中未检出普通变形杆菌和奇异变形杆菌； 结果判定为阳性，报告该批样本中检出普通变形杆菌和（或）奇异变形杆菌。 6 阳性结果处置 判断为阳性结果的分离株应由有资质的相关实验室确认，阳性结果确认后应及时上报主管部门。 2