SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3952—2014 国境口岸甲型流感病毒检测方法 Dot-ELISA 法 Detection of influenza A virus at frontier port-Dot-ELISA 行业标准信息服务平台 2014-04-09发布 2014-11-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3952—2014 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、厦门大学公共卫生学院。 本标准主要起草人：杨坤宇、陈慧、吴冰冰、张毅、李庶甘、陈帆、陈毅歆、林青、杨剑。 行业标准信息服务平台 SN/T3952—2014 国境口岸甲型流感病毒检测方法 Dot-ELISA 法 1范围 本标准规定了甲型流感病毒的术语和定义、生物安全防护要求、样本的采集与处理、酶联免疫渗滤 法的检测步骤、结果判定、检测报告与阳性结果的处置。 本标准适用于在国境口岸对人感染甲型流感病毒的检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB19489实验室生物安全通用要求 SN/T2752.1卫生检疫人员的自我防护规范 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 甲型流感病毒influenzaAyirus 甲型流感病毒归属于正粘病毒科（Orthomyxoviridae），是一种球形或杆状、有包膜的单股负链 RNA病毒。甲型流感病毒可以感染禽类、人和猫等哺乳动物，根据表面糖蛋白血凝素（HA）和神经氨 酸酶（NA）抗原性的不同，可将甲型流感病毒分成16个H和9个N亚型。甲型流感病毒可引起急性呼 吸道传染病，该病主要通过空气中的飞沫、人与人之间的接触、被污染物品的接触传播。典型的临床症 状为迅速发热、浑身酸痛、乏力等。 3.2 核蛋白nucleocapsid；NP 由甲型流感病毒基因组第5片段编码，含498个氨基酸，是一种单体磷酸化的非糖基化蛋白，与3 种RNA多聚酶一起构成核糖核酸蛋白体（RNPs）,RNPs与RNA聚合酶共同构成病毒的核心部分 NP在流感病毒的8个基因中最为保守，具有型特异性,是将流感病毒分为A、B、C三种型的重要依据。 3.3 酶联免疫渗滤法dot-enzymelinkedimmunosorbnentassay；dot-ELISA 甲型流感酶联免疫渗滤法采用酶联免疫原理中的双抗体夹心法和免疫渗滤技术，用于检测样本中 处理后，被硝酸纤维膜上的单克隆抗体捕获，形成抗原-抗体复合物，再加入抗NP抗原的酶标抗体，形 成抗体-抗原-酶标抗体复合物，最后通过酶催化底物显色进行结果判定。 4生物安全防护要求 现场采样人员的个人防护应符合SN/T2752.1的要求，实验室结构和设施、安全操作规范、安全设 1 SN/T3952—2014 备、试验人员防护及废弃物品处理应符合GB19489中二级生物安全防护实验室的要求 5检测对象 疑似感染流感病毒的入出境旅客及国际航行交通工具员工，国境口岸现场的工作人员及其他申请 检测人员。 6材料与试剂 6.1仪器和耗材 振荡器、可调式微量加样器、普通冰箱（2℃～8℃）、超低温冰箱（一70℃）、压舌板、带有聚丙烯纤 维头的采样拭子、与可调式微量加样器配套使用的滤芯吸头、能装2mL液体的尖嘴塑料过滤瓶。 6.2试剂 Hanks液、裂解液、反应板、标本洗涤液、酶标试剂、显色液、终止液等检测所需的各种试剂的准备 参见附录A。除另有规定外，所有化学试剂均采用分析纯。 7标本的采集、处理与转运 7.1标本的采集 7.1.1咽拭子：嘱受采集人员发“啊”音，必要时以压舌板轻压舌部，用带有聚丙烯纤维头的拭子适度用 力擦拭双侧扁桃体及咽后壁，应避免触及舌部。将拭子折断，弃去手接触部分，将带有医用棉签的部分 转，保持数秒，待拭子头吸收分泌物以后缓慢转动退出。将拭子折断，弃去手接触部分，将带有医用棉 签的部分浸泡至1mL～2mL的Hanks液体中。在标本保存管上标注被采集人员姓名、采集时间和 标本编号。 7.2标本的转运与保存 7.3标本的保存 如果标本在2天内检测，可暂时储存于2℃～8℃；如果标本在2天以后检测，保存于-70℃以下， 标本避免反复冻融。 8 实验室检测 8.1检测前处理 检测前将试剂盒平衡至室温（约15min），用振荡器将标本振荡混匀。 1）检测过程和结果判定以北京万泰生物药业股份有限公司生产的甲型流感病毒抗原（FluA-Ag）快速诊断试剂盒 为例。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对这一产品的认可，其他等效市售商品试剂盒也可采用，操 作时应严格按照试剂盒说明书要求进行。 2