ICS 67.040 CCS B 04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 3945—2021 植物源性食品中游离态留醇、结合态留醇 及总留醇的测定 气相色谱串联质谱法 Determination of free,bound and total sterols in foods of plant origin bygas chromatography-mass spectrometry 行业标准信息服务平台 2021-11-09发布 2022-05-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T3945—2021 剪服勿言 全国农业全品标准 公共 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由农业农村部农产品质量安全监管司提出。 本文件由农业农村部农产品营养标准专家委员会归口。 本文件起草单位：浙江大学、农业农村部农产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室（杭州）。 本文件主要起草人：陆柏益、王蒙蒙、胡银洲、杨博文、钟永恒、徐涛。 行业标准信息服务平台 NY/T 3945—2021 植物源性食品中游离态备醇、结合态备醇及总备醇的测定 气相色谱串联质谱法 1范围 本文件规定了植物源性食品中游离态留醇、结合态笛醇及总笛醇的测定方法。 本文件适用于植物源性食品中留醇类化合物量的测定 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过义中的规范性引用而成大B件必不可少的条款。 其中，注日期的引用文件， 文件。 GB/T6682 分析实验 全用水观 RESEAR 3术语和定义 下列术语和定义适 用 3. 1 植物源性食品 plant origin 织部分为原料，直接或加工以后为人类提供能量或生 质光原 以植物的种子 原的食品。 CH 3. 2 游离态备醇 以游离状态存在 3. 3 结合态备醇 bou 以结合态存在的 3. 4 总笛醇 total ster 以游离态和结合态存在的省醇的 4原理 非食用油类样品采用索氏抽提法提取油脂，油脂通过固相萃取分离得到游离态留醇；油脂用氢氧化 钾乙醇溶液皂化后，以二氯甲烷进行液液牵取分离得到总留醇 以胆烷醇为内标，经气相色谱分离、 服务平台 5试剂和材料 5.1试剂 5.1.1正已烷（C,H14，CAS号：110-54-3）：色谱纯。 5. 1. 2 正已烷（CH14，CAS号：110-54-3）。 5.1.3石油醚（CH12，CAS号：8032-32-4)：30℃~60℃沸程。 5. 1. 4 乙醚（C,HloO.CAS号：60-29-7)。 5. 1.5 乙醇（CH.O.CAS号：64-17-5)。 5. 1. 6 丙酮（CHCOCH，CAS号：67-64-1)：色谱纯。 1 NY/T 3945—2021 5.1.7 二氯甲烷（CHzCz，CAS号：75-09-2）。 5.1.8无水硫酸钠（Na2SO，CAS号：7757-82-6）。 5.1.9氢氧化（KOH.CAS号：1310-58-3）。 5.1.10N-甲基-N三甲基硅烷七氟丁酰胺（C.H2F,NOSi.CAS号：53296-64-3）。 5.1.111-甲基咪唑（CH.N2,CAS号：616-47-7)。 5.1.12乙醚-正已烷溶液（10：90，V：V）：量取乙醚（5.1.4)10ml，加人正已烷（5.1.2）90mL，混勾，现 用现配。 5.1.13乙醚-正已烷溶液（20：80.V：V）：量取乙醚（5.1.4）20mL，加人正已烷（5.1.2)80mL，混匀，现 用现配。 5.1.14氢氧化乙醇溶液（2mol/L）：称取氢氧化钾（5.1.9)11.2g（精确至1mg），10mL水溶解，用乙 醇（5.1.5）定容至100mL，现用现配。 5.1.15硅烷化试剂：称取N-甲基-N-三甲基硅烷七氟丁酰胺（5.1.10)950μL，加人1-甲基咪唑（5.1.11 50uL，现用现配。 5.2标准品 5.2.1胆固醇（Cholesterol.CA.S号：57-88-5），纯度≥99%。 5.2.2胆留烷醇（Cholestanol.CAS号：80-97-7），纯度≥95%。 5.2.3菜籽笛醇（Brassicasterol,CAS号：474-67-9)，纯度≥95%。 5.2.4菜油笛醇（Campesterol,CAS号：474-62-4），纯度≥95%。 5.2.5菜油烷醇（Campestanol，CAS号：474-60-2)，纯度≥95%。 5.2.6豆笛醇（Stigmasterol.CAS号：83-48-7），纯度≥95%。 5.2.7 β谷笛醇（β-Sitosterol，CAS号：83-46-5），纯度≥95%。 5.2.8 豆笛烷醇（StigmastanolCAS号：83-45-4），纯度≥95%。 5.2.9麦角留醇（Ergosterol.CAS号：57-87-4），纯度≥95%。 5.2.10标准混合储备溶液（1000ug/mL）：准确称取一定量的胆固醇、菜籽留醇、菜油甾醇、豆留醇、β-谷 笛醇、豆留烷醇、麦角笛醇和菜油笛烷醇标准品（精确至0.1mg），用丙酮（5.1.6）分别配制为1mg/mL的 单标溶液。精确量取上述8种标准溶液各1mL，用氮气缓缓吹干溶剂，再用1mL丙酮（5.1.6）复溶，配 制成浓度1mg/mL的标准混合储备溶液。一18℃以下避光保存，保存期为3个月。 5.2.11标准中间工作液（100#g/ml）：移取标准混合储备溶液（5.2.10），以丙酮（5.1.6）为溶剂，配制成 100μg/mL的标准中间工作液，现用现配。1 5.2.12内标溶液：准确称取胆留烷醇标准品，以丙酮（5.1.6）为溶剂，配制成浓度为200ug/mL的内标 溶液。 5.3材料 5.3.1固相萃取柱：无键合硅胶填料固相萃取柱（500mg/6ml）或其他等效柱。 5.3.2反应瓶：容量1mL，具螺纹瓶盖和聚四氟乙烯（PTFE）线纹封口。 6仪器和设备 6.1气相色谱串联质谱仪：配电子轰击电离源。 6.2分析天平：感量0.1g.0.01g和0.1mg。 6.3涡旋振荡器。 6.4离心机：转速≥5000r/min。 6.5组织捣碎机。 6.6固相萃取设备：要求能够控制活化、上样、淋洗和洗脱的速度。 2